Mélange maître PCR Hotstart HYA444
Le Hotstart PCR Master Mix est un produit d'amplification PCR universel développé par notre société. Ce produit utilise une enzyme d'amplification rapide à chaud, avec une vitesse d'amplification maximale de 1 kb/10 s et une efficacité d'extension élevée, ce qui le rend idéal pour les réactions PCR rapides. De plus, sa bonne résistance aux inhibiteurs d'amplification PCR le rend particulièrement adapté à la détection à haut débit.
Composants
2× Hotstart PCR Master Mix
*Ce réactif contient déjà des composants tels que l'enzyme de démarrage à chaud, le tampon PCR, les dNTP, le MgCl₂, des stabilisateurs et des activateurs.
Stockage
À conserver à long terme à -20 °C ; peut être conservé à 4 °C pendant 3 mois. Bien mélanger avant utilisation et éviter les cycles de congélation-décongélation répétés.
Système de réaction
| Composants | 25uL Système de réaction | 50 µL Système de réaction |
| 2× Hotstart PCR Master Mix | 12,5 µL | 25 µL |
| 25×PrimerMix* | 1 µL | 2 µL |
| Modèle** | -- | -- |
| ddH2LE | Jusqu'à 25 µL | Jusqu'à 50 µL |
*Une concentration finale d'amorces de 0,2 μM donne généralement des résultats optimaux. Si l'efficacité d'amplification est faible, ajustez la concentration d'amorces entre 0,2 et 1,0 μM.
Le nombre de copies des gènes cibles varie selon le type de matrice. Procédez à des dilutions en série pour déterminer le volume optimal de matrice pour votre échantillon.
Conditions de réaction
| Protocole PCR standard | |||
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| Digestion | 50℃ | 2 min | 1 |
| Démarrage à chaud | 95 °C | 1 à 5 min | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 10-20 s | 30 |
| recuit | 55~65℃ | 10-30 s | |
| Extension | 72℃ | xs* | |
| RapideProtocole PCR | |||
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| Digestion | 50℃ | 2 min | 1 |
| Démarrage à chaud | 95 °C | 1-2 min | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 10 s | 25-30 |
| Recuit et extension | 55~65℃ | x s* | |
*Il est recommandé d'effectuer le calcul sur la base d'une taille de fragment maximale de 10 à 20 secondes/ko.
Contrôle de qualité
1. Tests fonctionnels : sensibilité, spécificité et reproductibilité de la PCR.
2. Exempt d'activité nucléasique exogène ; aucune contamination par des endonucléases ou des exonucléases exogènes.
Description technique
1. Utiliser un démarrage à chaud de 95℃ ou 94℃ pendant 1 à 5 minutes ;
2. Le taux d'amplification de l'ADN polymérase rapide peut atteindre jusqu'à 1 kb/10 s.
3. Le système présente une grande adaptabilité et convient aux réactions d'amplification rapides.
4. L'ADN polymérase rapide possède une activité polymérase 5'-3' et une activité exonucléase 5'-3' ; aucune activité exonucléase 3'-5' et aucune fonction de relecture.
5. Convient aux méthodes de détection PCR ordinaires, aux puces à ADN et autres méthodes de détection.
6. L'extrémité 3' du produit PCR est A, et le produit peut être directement cloné dans le vecteur T.
7. Si l'efficacité d'amplification n'est pas suffisante lors du réglage de l'extension à 10 secondes/kb, elle peut être étendue à 20 secondes/kb ou à une durée d'extension plus longue.
8. Lorsque l'échantillon brut n'est pas bien amplifié, le modèle peut être dilué de manière appropriée puis amplifié.