ADN polymérase Taq Hotstart HYA113
Ce produit inhibe efficacement les réactions non spécifiques dues à l'hybridation non spécifique des amorces ou à la formation de dimères d'amorces lors de la préparation et de l'amplification du système PCR, garantissant ainsi une excellente spécificité. Il permet une amplification plus efficace des matrices à faible concentration et convient aux réactions d'amplification PCR multiplex. De plus, il présente une compatibilité remarquable avec divers systèmes de réaction, assurant des performances d'amplification stables et constantes pour différents types de réactions PCR.
Composants
1. 5 U/µL de Taq polymérase Hotstart
2. Tampon PCR 10× (Mg2+ gratuit) (facultatif)
3. 25 mMgCl2(facultatif)
Tampon PCR 10× (Mg2+ (sans) ne contient pas de dNTP ni de Mg2+Veuillez ajouter des dNTP et du MgCl₂.2lors de la préparation du système réactionnel.
Activité Définition
Une unité d'activité (U) est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 10 nmol de désoxynucléotides dans un matériau insoluble dans l'acide, en utilisant l'ADN de sperme de saumon activé comme matrice/amorce, dans les conditions de 74℃ pendant 30 minutes.
Stockage
Conserver à -20 °C pour une conservation à long terme. Bien mélanger avant utilisation et éviter les cycles de congélation-décongélation répétés.
Contrôle de qualité
1. Pureté électrophorétique par SDS-PAGE ≥ 98 %.
2. Sensibilité à l'amplification, variation inter-lots et stabilité.
3. Exempt d'activité nucléasique exogène, ainsi que de contamination par des endonucléases et des exonucléases exogènes.
Instructions
1. Système de réaction PCR
| Composants | Volume | Concentration dans le mélange maître |
| Tampon PCR 10× (Mg2+gratuit)* | 5 µL | 1× |
| dNTP (10 mM de chaque dNTP) | 1 μL | 200 µM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/µL de Taq polymérase Hotstart | 0,25-0,5 μL | 1,25-2,5 U |
| Mélange d'apprêt 25×** | 2 μL | 1× |
| Modèle | — — |
|
| ddH2LE | Jusqu'à 50 µL | — — |
*Le tampon PCR 10 × ne contient pas de dNTP ni de Mg²⁺ et doit être complété avec des dNTP et du MgCl₂ avant utilisation.
**Pour les qPCR/qRT-PCR, une sonde fluorescente doit être ajoutée au système réactionnel. Une concentration finale d'amorces de 0,2 μM donne généralement des résultats optimaux ; si les performances de la réaction sont insuffisantes, la concentration d'amorces peut être ajustée entre 0,2 et 1 μM. La concentration de sonde est généralement optimale entre 0,1 et 0,3 μM. Des expériences de gradient de concentration peuvent être réalisées pour identifier la combinaison optimale d'amorces et de sondes.
2. Réaction Programme
| Méthode en deux étapes | |||
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| démarrage à chaud | 95 °C | 1 à 5 min | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 10-20 s | 35-50 |
| Extension de recuit | 56~64℃ | 20-60 s | |
| Trois-méthode par étapes | |||
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| démarrage à chaud | 95 °C | 1 à 5 min | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 10-20 s | 35-50 |
| recuit | 56~64℃ | 10-30 s | |
| Extension | 72℃ | 10-60 s | |
Spécifications techniques
1. Permet un démarrage à chaud rapide à 95℃ ou 94℃ pendant 1 à 5 minutes.
2. Présente une excellente compatibilité avec les systèmes de réaction, ainsi qu'une spécificité et une sensibilité accrues.
3. Convient aux réactifs de détection PCR haute sensibilité et compatible avec les réactions d'amplification PCR multiplex.
4. Possède une activité polymérase 5'-3' et une activité exonucléase 5'-3' ; est dépourvu d'activité exonucléase 3'-5' et de fonction de relecture.
5. Applicable pour la détection qualitative et quantitative en PCR conventionnelle et RT-PCR.
6. Les produits PCR présentent un surplomb A à l'extrémité 3', permettant une utilisation directe pour le clonage du vecteur T.
7. Pour les amorces avec des températures d'hybridation basses ou l'amplification de longs fragments dépassant 200 pb, il est recommandé d'utiliser le protocole PCR en trois étapes.
8. À usage de recherche uniquement !