Mélange maître fluorescent LAMP HIB314
Ce produit contient un tampon de réaction, un mélange enzymatique de polymérase d'ADN Bst, un protecteur lyophilisé et des composants de colorant fluorescent. Le tampon de réaction contient du magnésium.2+Pour l'amplification, les utilisateurs peuvent mélanger directement le tampon de réaction, le mélange enzymatique, le colorant fluorescent et l'amorce, puis ajouter la matrice. Si nécessaire, ils peuvent ajouter le protecteur lyophilisé pour préparer un système lyophilisable.
Composants
| Composants | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Tampon d'amplification à boucle | 1,2 mL | 4 mL × 3 | 12 mL × 10 |
| Mélange d'enzymes | 192 μL | 1,92 mL | 1,92 mL × 10 |
| protecteur lyophilisé | 0,96 mL × 2 | 9,6 mL | 9,6 mL × 10 |
| 25× Teinture | 192 μL | 0,96 mL × 2 | 0,96 mL×20 |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C, valable 12 mois.
Instruction
1. Décongeler le tampon de réaction à utiliser à température ambiante. Vortexer brièvement ou retourner les tubes plusieurs fois pour bien mélanger, puis centrifuger pour recueillir le liquide au fond du tube.
2. Préparation du mélange réactionnel : ce réactif peut être préparé dans deux systèmes de réaction, un mélange réactionnel liquide et un mélange par lyophilisation.
1) Préparation du système de réaction liquide
| Composant | Volume |
| Tampon d'amplification à boucle | 10 µL |
| 25× Teinture | 2 μL |
| Mélange d'enzymes | 2 μL |
| Mélange d'apprêt 10×* | 5 μL |
| ADN matrice** | X μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
2) Préparation du système réactionnel lyophilisé
① Préparation du système lyophilisé
| Composant | Volume |
| Tampon d'amplification à boucle | 12,5 µL |
| protecteur lyophilisé | 10 μL |
| 25× Teinture | 2 μL |
| Mélange d'enzymes | 2 μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
② Lyophilisation
Le mélange préparé a été lyophilisé dans un système de 50 μL.
③ Préparer le mélange réactionnel
| Composant | Volume |
| Produit lyophilisé | 1 pièce |
| Mélange d'apprêt 10×* | 5 μL |
| ADN matrice** | x μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
*10× Concentration du mélange d'amorces : 16 µM FIP/BIP, 2 µM F3/B3, 4 µM Loop F/B ;
**Il est recommandé de dissoudre la matrice d'acide nucléique dans de l'eau DEPC.
3. Programme de réaction
Configurez les paramètres de l'instrument PCR (tel que l'ABI7500) comme suit :
| Température | Temps | Cycles |
| 65℃ | 60 s **Collecte du signal fluorescent | 30 |
Notes
1. Du sel peut apparaître au fond du tube tampon ; vortexez brièvement ou retournez les tubes plusieurs fois pour bien mélanger à température ambiante.
2. La température de réaction peut être optimisée entre 62 °C et 68 °C en fonction de l'amorce.
3. L'expérience doit être menée de manière normalisée, y compris la préparation du système réactionnel, le traitement de l'échantillon et l'échantillonnage.
4. Il est suggéré de préparer le système de réaction sur la table ultra-propre et d'ajouter des gabarits dans la hotte des autres pièces pour éviter les erreurs.