DNase I recombinante Hyasen : votre solution de choix pour la préparation d’ARN et l’élimination des résidus d’ADN
Qu'est-ce que la DNase I ? En termes simples, il s'agit d'une endonucléase spécialisée dans la dégradation des molécules d'ADN. Appartenant à la famille des désoxyribonucléases, sa fonction principale est d'hydrolyser les liaisons phosphodiester de l'ADN, clivant ainsi les longs brins d'ADN en courts fragments oligonucléotidiques. Ces fragments portent généralement des groupements phosphate en 5', facilitant les manipulations expérimentales ou les processus biologiques ultérieurs. La DNase I est utilisée dans de nombreuses expériences de biologie moléculaire, notamment l'extraction d'ARN, la construction de banques d'ADNc, la transcription inverse, ainsi que la RT-qPCR et la transcription in vitro. Cet article présente cette enzyme en détail.
Historique du développement de la DNase I
Traditionnellement, la DNase I était principalement extraite du pancréas bovin, d'où son appellation de « DNase I d'origine bovine ». Le pancréas bovin est riche en cette enzyme, car elle contribue à la décomposition de l'ADN ingéré dans le système digestif de l'animal. Grâce aux progrès de la biotechnologie, les chercheurs ont produit la « DNase I recombinante » (rDNase I) par génie génétique, en exprimant des séquences d'origine humaine ou bovine dans des bactéries (comme Escherichia coli) ou des levures. Comparée à la DNase I extraite du pancréas bovin, la DNase I recombinante évite les risques liés à l'utilisation de produits d'origine animale et présente des avantages en termes de pureté, d'activité, de stabilité, d'innocuité et autres.
Principales applications de la DNase I
Traitement des échantillons d'ARN et élimination des résidus d'ADN dans les systèmes qPCR
L'ADN génomique est souvent présent lors de la préparation d'ARN, ce qui affecte la précision du séquençage du transcriptome ou de la PCR quantitative en temps réel (RT-qPCR). La DNase I est un outil de référence pour éliminer cette contamination par l'ADN lors de la préparation d'ARN. Elle dégrade efficacement l'ADN contaminant par une incubation de courte durée, sans altérer l'ARN.
Élimination de l'ADN matrice lors de la transcription in vitro
La transcription in vitro (IVT) utilise principalement l'ADN comme matrice, et l'ARN est obtenu par transcription in vitro avec les substrats et tampons appropriés. Lors des expériences d'IVT, l'ARN synthétisé peut contenir des traces d'ADN ; l'élimination de ces résidus permet de simplifier les étapes de purification ultérieures et d'améliorer la pureté du produit.
DNase I recombinante Hyasen
