Prémélange SYBR Green RT-qPCR en une étape
Référence : HCB5140A
Le kit One Step RT-qPCR Syber Green Premix est destiné à la quantification par fluorescence basée sur le colorant SYBR Green I. Grâce à des amorces spécifiques de gènes, les réactions de transcription inverse et de qPCR sont réalisées dans un seul tube, éliminant ainsi les manipulations répétées (ouverture et pipetage). Cette méthode améliore considérablement l'efficacité du test et réduit le risque de contamination. Pour les échantillons d'ARN, le kit utilise une transcriptase inverse thermorésistante pour une synthèse d'ADNc efficace et la Taq polymérase HotStart pour une amplification quantitative. Avec un système tampon optimisé, la sensibilité du kit peut atteindre 0,1 pg pour les cibles fortement exprimées et 1 pg pour les cibles modérément exprimées. Ce kit convient à l'amplification et à la quantification d'échantillons d'ADN. Il permet la détection et la quantification sensibles des acides nucléiques provenant de différents échantillons végétaux et animaux, de cellules et de micro-organismes.
Composants
| Non | Nom | Volume | Volume |
| 1 | Tampon avancé | 250 μL | 2 × 1,25 mL |
| 2 | Mélange enzymatique avancé | 20 μL | 200 μL |
| 3 | H sans RNase2LE | 250 μL | 2 × 1,25 mL |
Conditions de stockage
Ce produit doit être conservé à une température de -25 à -15 °C, à l'abri de la lumière, pendant 1 an.
Instructions
1. Configuration du système de réaction d
| Composants | Volume (μL) | Volume (μL) | Concentration finale |
| Tampon avancé | 12,5 | 25 | 1× |
| Mélange enzymatique avancé | 1 | 2 | - |
| Amorce directe (10 μmol/L)un | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Amorce inverse (10 μmol/L)un | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Modèle d'ARNb | X | X | - |
| H sans RNase2LEc | jusqu'à 25 ans | jusqu'à 50 ans | - |
Remarques :
1) a. TLa concentration finale d'amorce était de 0,2 μmol/L, qui pouvait également être ajustée entre 0,1 et 1 μmol/L selon les besoins.
2) b. Le réactif est extrêmement sensible, avec de l'ARN total dans la gamme de 1 pg à 1 µg, et les tests sur des échantillons humains ont montré une entrée optimale de 1 pg à 100 ng, en contrôlant une valeur Ct globale dans la gamme de 15 à 30, le cas échéant.
3) c. Il est recommandé d'utiliser 20 μL ou 50 μL pour assurer la validité et la reproductibilité de l'amplification du gène cible.
4) d. Veuillez effectuer la préparation sous une hotte à flux laminaire et utiliser des embouts et des tubes à réaction exempts de résidus de nucléase ; l’utilisation d’embouts avec cartouches filtrantes est recommandée. Évitez toute contamination croisée et par aérosol.
2.Programme de réaction
| Étape du cycle | Temp. | Temps | Cycles |
| Transcription inverse | 50℃un | 6 minutes | 1 |
| dénaturation initiale | 95℃ | 5 minutes | 1 |
| Réaction d'amplification | 95℃ | 15 secondes | 40 |
| 60℃b | 30 secondes | ||
| Étape de la courbe de fusion | Valeurs par défaut de l'instrument | 1 | |
Remarques :
1) a. La température de transcription inverse peut être choisie entre 50 et 55 °C selon les besoins expérimentaux. Pour les échantillons d'ADN, la transcription inverse peut être omise.
2) b. Dans certains cas particuliers, la température de recuit/extension peut être ajustée en fonction de la valeur Tm de l'apprêt ; 60 °C est recommandé.
Notes
1. Ce produit est destiné uniquement à la recherche.
2. Veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pour votre sécurité.
