Pyrophosphatase inorganique (levure) HYJ221
La pyrophosphatase inorganique (levure) est issue d'une souche recombinante d'Escherichia coli portant le gène de la pyrophosphatase inorganique de Saccharomyces cerevisiae. Cette enzyme catalyse l'hydrolyse du pyrophosphate inorganique pour produire de l'orthophosphate.
P207–4+ H20 → 2HP04–2
Dans des réactions telles que l'amplification des acides nucléiques et la transcription in vitro, la pyrophosphatase inorganique hydrolyse le pyrophosphate inorganique généré, levant ainsi l'inhibition exercée par ce dernier sur le système réactionnel. L'élimination du pyrophosphate déplace l'équilibre de la réaction vers la formation du produit, augmentant de ce fait le rendement de la synthèse. Par exemple, lors des réactions de synthèse d'ARN et d'ADN, l'action de la pyrophosphatase inorganique déplace l'équilibre de la réaction vers la formation du produit.
Composants
| Composants | 10U | 50U | 100U | 1À | 10KU |
| Pyrophosphatase inorganique (levure) 0,1 U/μL | 0,1 mL | 0,5 mL | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C. Se conserve 2 ans (éviter les cycles de congélation-décongélation répétés).
tampon de stockage
20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM dithiothréitol, 50 % glycérol.
Définition de l'activité
Une unité d'activité (U) est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour catalyser l'hydrolyse du pyrophosphate inorganique afin de produire 1 μmol de phosphate par minute dans des conditions de réaction standard.
Les conditions réactionnelles standard sont les suivantes : un système réactionnel de 500 µL contenant 100 mM de Tris-HCl (pH 7,2, 25 °C) et 2 mM de MgCl₂.2, et 2 mM de pyrophosphate inorganique, à 25 °C pendant 10 min.
Contrôle de qualité
1. Activité exonucléase : Lorsque 0,1 U de ce produit a réagi avec 1 μg d'ADN digéré par λ-Hind III à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
2. Activité endonucléase : Lorsque 0,1 U de ce produit a réagi avec 1 μg d'ADN λ à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
3. Activité de la nickase : Lorsque 0,1 U de ce produit a réagi avec 1 μg de pBR322 à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
4. Activité RNase : Lorsque 0,1 U de ce produit a réagi avec 1,6 μg d'ARN MS2 à 37 °C pendant 4 heures, la bande électrophorétique de l'ARN est restée inchangée.
5. Détection de l'ADN résiduel d'E. coli : La présence d'acide nucléique résiduel dans 0,1 U de ce produit a été détectée par qPCR à l'aide d'un kit TaqMan PCR spécifique de l'ADNr 16S d'E. coli. Détection : résidu du génome d'E. coli ≤ 1 copie.
6. Endotoxine : Test LAL, Pharmacopée chinoise édition 2020, Partie IV, Test de limite de gel, Règles générales (1143), teneur en endotoxines bactériennes ≤ 10 UE/mg.
Applications
Augmenter le rendement en ARN lors des réactions de transcription.