Kit de dosage quantitatif d'ADN double brin Qubit HYD414
Le kit de dosage 1×dsDNA HS est un kit de détection quantitative fluorescente rapide, très sensible et précis pour l'ADN double brin (dsDNA). Ce kit permet de détecter le dsDNA dans une gamme de 10
Ce kit, d'une plage de mesure de pg/µL à 100 ng/µL, présente une excellente linéarité (R² > 0,99). Simple d'utilisation, il fournit une solution prête à l'emploi permettant la quantification aisée d'échantillons d'ADN double brin sur fluorimètre Qubit ou lecteur de microplaques à fluorescence. Il constitue le choix idéal pour la quantification à grande échelle d'échantillons d'ADN par séquençage de nouvelle génération (NGS), notamment pour la quantification d'ADN d'entrée ou de banques d'ADN. Ce kit est parfaitement tolérant aux contaminants courants tels que les protéines et les sels.
Composition du réactif
| Composants | Concentration | 100T | 500T |
| solution concentrée dsDNA HS | concentré 200× dans du DMSO | 250 μL | 1,25 mL |
| Tampon dsADN | Tampon 1X | 50 mL | 250 mL |
| dsADN Standard 1 | 0 ng/μL dans le tampon TE | 1 mL | 5×1 mL |
| dsADN Standard 2 | 10 ng/μL dans un tampon TE | 1 mL | 5×1 mL |
Conditions de stockage
Tous les composants sont expédiés avec un bloc réfrigérant et peuvent être conservés à une température de 2 à 8 °C à l'abri de la lumière pendant un an.
Instructions
1. Préparation expérimentale
La solution concentrée de dsDNA HS est conservée dans des solvants organiques. Pour préparer une solution de travail 1X, diluez la solution concentrée de dsDNA HS dans le tampon dsDNA selon un ratio de 1:199, par exemple 100 µL de solution concentrée de dsDNA HS pour 199 µL de tampon dsDNA. Le réactif s'adsorbant facilement sur les surfaces en verre, il est nécessaire de le préparer dans un récipient en plastique. La solution concentrée de dsDNA HS étant sensible à la lumière, conservez-la à l'abri de celle-ci.
2. Préparer les normes et les échantillons
2.1 Préparer un nombre suffisant de tubes de 0,5 mL et étiqueter le couvercle. Ne pas étiqueter la paroi latérale du tube afin de ne pas perturber la collecte du signal de fluorescence.
2.2 Ajouter 190 μL de solution de travail 1× dans un tube de 0,5 mL, puis ajouter 10 μL d'étalon dsADN 1 et d'étalon dsADN 2 dans le tube PCR correspondant. Vortexer doucement pendant 2 à 3 secondes en veillant à ne pas former de bulles.
2.3 Ajouter 180 à 199 µL de solution de travail 1× et 1 à 20 µL de chaque échantillon d'ADN dans le tube de 0,5 mL approprié. Le volume final de chaque échantillon dans le tube est de 200 µL. Vortexer doucement pendant 2 à 3 secondes en veillant à ne pas former de bulles.
3. Détection
3.1 Incuber à température ambiante pendant 2 min à l'obscurité.
3.2 Conformément au mode d'emploi du Qubit® Fluoromètre, sélectionnez le programme de détection haute sensibilité de l'ADN double brin pour mesurer la valeur du signal de fluorescence.
Notes
1. Le colorant fluorescent (solution concentrée d'ADN double brin HS) présente un problème d'extinction de fluorescence. Veuillez éviter toute exposition à la lumière afin de ralentir ce phénomène.
2. Il est recommandé de préparer immédiatement une solution de travail 1X pour garantir les meilleurs résultats.
3. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables lors de l'utilisation.