DNase I recombinante (sans RNase) HYC117
La DNase I est une endonucléase capable de digérer l'ADN simple brin et double brin pour produire des désoxynucléotides simples ou des oligodésoxynucléotides simple brin ou double brin. Elle hydrolyse la liaison phosphodiester pour produire des monodésoxynucléotides et des oligodésoxynucléotides contenant des groupes phosphate en 5' et hydroxyle en 3'. Le produit de digestion moyen est le plus petit polytétranucléotide. La DNase I peut catalyser de nombreuses formes d'ADN, telles que l'ADN simple brin, l'ADN double brin et même la chromatine (son taux de clivage est influencé par les histones). Son pH optimal se situe entre 7 et 8. L'activité de la DNase I dépend du Ca²⁺.+ et peut être activé par des ions métalliques divalents, tels que le Co2+, Mn²+, Zn²+, etc. 5 mM Ca²+ peut protéger l'enzyme de l'hydrolyse. En présence de Mg²⁺+, l'enzyme peut reconnaître et couper n'importe quel site sur n'importe quel brin d'ADN de manière aléatoire ; et en présence de Mn²+, elle peut reconnaître deux brins d'ADN en même temps et les couper presque au même endroit pour former des extrémités franches, ou des extrémités collantes avec 1 à 2 nucléotides qui dépassent.
Composants
| Composants | 1KU | 5KU | 50KU |
| DNase I recombinante (sans RNase) | 200 μL | 1 mL | 10 mL |
| Tampon DNase I 10 × | 1 mL | 5×1mL | 5 × 10 mL |
Stockage
Conserver à -15°C ~ -25°C pendant un an.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui dégradera complètement 1 µg d'ADN pBR322 en 10 minutes à 37 °C.
Spécification
| Source | La DNase I du pancréas bovin a été exprimée dans un système d'expression de levure et purifiée. |
| Tampon de stockage | Tris-HCl 10 mM, CaCl2 2 mM, glycérol 50 %, pH 7,6 à 25 °C. |
| Activité RNase | 5 U de DNase I avec 1,6 μg d'ARN MS2 pendant 4 heures à 37 ℃ ne produisent aucune dégradation, comme déterminé par électrophorèse sur gel d'agarose. |
Instructions
1. Préparer la solution réactionnelle dans le tube sans RNase selon les proportions indiquées ci-dessous.
| Composants | Volume |
| ARN | X μg |
| Tampon DNase I 10× | 1 µL |
| DNase I recombinante (sans RNase) | 1 U par μg d'ARN* |
| ddH₂O sans RNase | Jusqu'à 10 μL |
Calculer le volume de DNase I à ajouter en fonction de la quantité d'ARN. Utiliser 1 U de DNase I par µg d'ARN. Toutefois, si la quantité d'ARN est inférieure à 1 µg, utiliser 1 U de DNase I.
2. 37 ℃ pendant 15 minutes ;
3. Ajouter de l'EDTA 0,5 M pour obtenir une concentration finale de 2,5 à 5 mM, puis chauffer à 65 °C pendant 10 minutes pour stopper la réaction. L'échantillon peut être utilisé directement pour la réaction suivante, par exemple une expérience de transcription inverse.