Kit de détection d'endotoxines du facteur C recombinant HYI131
Le kit de détection d'endotoxines par facteur C recombinant peut remplacer le lysat d'amébocytes de Limulus (LAL) traditionnel pour la détection d'endotoxines dans les matières premières, les produits intermédiaires et les produits libérés des médicaments injectables à usage humain et vétérinaire (tels que les produits chimiques, les produits radiopharmaceutiques, les antibiotiques, les produits biologiques, etc.) et des dispositifs médicaux (tels que les dialysats, les dispositifs implantables, etc.). Ce kit constitue une alternative très sensible, très spécifique, stable et durable au LAL, et ne dépend d'aucun composant d'origine animale. Il permet de mesurer des concentrations d'endotoxines comprises entre 0,005 et 5 UE/mL.
Principe de détection
Le facteur C de Limulus est une sérine protéase sensible aux endotoxines bactériennes présentes dans les cellules sanguines de Limulus. Dans le système d'agglutination sanguine de Limulus induit par les endotoxines bactériennes, le facteur C de Limulus est le premier à être activé par les endotoxines, initiant ainsi la cascade d'hémagglutination dans les cellules sanguines de Limulus. Le facteur C recombinant (rFC) est un facteur C recombinant exprimé par recombinaison génique. Ce facteur C recombinant, lié et activé par les endotoxines, clive le substrat pour libérer des fluorophores. La libération des fluorophores est proportionnelle à la concentration d'endotoxine, permettant ainsi la détection quantitative de cette dernière. Comparée à la méthode classique de détection des endotoxines dans le lysat d'amébocytes de Limulus, la méthode de détection des endotoxines par le facteur C recombinant présente une spécificité, une précision, une exactitude, une gamme linéaire et une limite de quantification supérieures, et constitue une méthode améliorée pour la détection des endotoxines dans le lysat d'amébocytes de Limulus.
Composants
| Réactif | 48T | 96T |
| Solution de substrat fluorescent | 3 mL | 6 mL |
| Tampon de mesure | 2,5 mL | 5 mL |
| solution enzymatique rFC | 0,6 mL | 1,2 mL |
| eau réactive LAL | 30 mL | 30 mL |
| Endotoxines de contrôle standard | 1 flacon | 2 flacons |
| Plaque de réaction détachable apyrogène à 96 puits | 1 pièce | 1 pièce |
Remarque : L’endotoxine de référence est une poudre lyophilisée. Consulter l’étiquette pour connaître le titre et le volume de reconstitution.
méthodes de transport et de stockage
Transport à une température de 2 à 8 °C. Dès réception du kit, le conserver immédiatement à une température de 2 à 8 °C. Les kits non ouverts ont une durée de conservation de 12 mois. L'endotoxine de référence, après dissolution, est conservée à une température de 2 à 8 °C et sa durée de conservation est de 8 semaines maximum.
Résumé de l'opération
Le dosage a été réalisé sur une plaque 96 puits. Les valeurs de fluorescence ont été mesurées à une longueur d'onde d'excitation/émission de 380/440 nm, immédiatement après l'ajout de l'échantillon et une heure après l'incubation à 37 °C ± 1 °C. La différence de fluorescence nette a été obtenue en calibrant la différence de fluorescence (ΔRFU) entre l'endotoxine standard et l'échantillon à l'aide de la différence de fluorescence (ΔRFU) du contrôle négatif. Le logarithme de la différence de fluorescence nette est proportionnel au logarithme de la concentration d'endotoxine et la relation est linéaire sur la plage de 0,005 à 5,0 UE/mL. La concentration d'endotoxine dans l'échantillon a ensuite été calculée à partir de la courbe d'étalonnage.
Consommables et équipements nécessaires
Tube de dilution en verre apyrogène jetable (pour la dilution standard d'endotoxines de contrôle) ; Pipettes et têtes d'aspiration stériles apyrogènes ; Agitateur vortex ; Minuteur ; Instrument de lecture de fluorescence capable de détecter la fluorescence (longueur d'onde réglée sur 380 nm/440 nm).