Digestion par trypsine recombinante (10×)-HYI213
La trypsine est une sérine protéase qui permet la dissociation des lignées cellulaires dépendantes de l'adhérence par clivage. Liaisons peptidiques C-terminales de la lysine et de l'arginine, hydrolyse des protéines intercellulaires, perturbation Connexions intercellulaires et dissociation des tissus. La solution digestive de trypsine recombinante Hyasen, une enzyme de haute pureté issue de la fermentation microbienne, est une alternative sans origine animale à la trypsine porcine ou bovine pour la digestion cellulaire dans les domaines de l'immunothérapie cellulaire, des vaccins, du criblage de médicaments, des anticorps et autres. Ce produit contient de l'EDTA et est exempt de rouge de phénol.
Composants
| Composants | Taille-1 | Taille 2 | Taille 3 |
| Digestion par trypsine recombinante (10×) | 10 mL | 100 mL | 500 mL |
Stockage
À conserver entre 2 et 8 °C ; à protéger de la lumière ; éviter les cycles de congélation-décongélation répétés.
Propriété du produit
- Bénin: La dissociation est plus spécifique et moins toxique grâce à l'action d'une seule enzyme et à sa grande pureté. Ce mécanisme permet également de réduire la dissociation et la destruction de diverses protéases présentes dans la trypsine animale et d'autres réactifs d'extraction.
- Sans ingrédients d'origine animale : Aucun matériau d'origine animale n'est utilisé dans le processus de production, il n'y a donc aucun risque d'incertitudes potentielles telles qu'une contamination par un virus exogène, et le produit est conforme à la réglementation en matière d'administration des médicaments.
- Écurie: Il peut être conservé à l'abri de la lumière pendant 12 mois dans des conditions de température de 2 à 8 °C ou de -20 à -5 °C.
- Pratique: Ce produit est une préparation stérile. Il peut remplacer la trypsine dans les expériences et sa dilution peut en réduire l'activité.
Instructions
La solution de digestion de trypsine recombinante EDTA (10x) est conçue pour la dissociation des lignées cellulaires dépendantes de l'attachement avec de fortes propriétés adhésives.
1. Préchauffer la solution digestive de trypsine et le milieu de croissance complet à 37 °C avant utilisation.
Remarque : La solution de digestion à la trypsine recombinante peut être utilisée à température ambiante pour de nombreux types de cellules.
2. Aspirer le milieu usé et le jeter.
3. Laver la monocouche cellulaire avec 5 mL de solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (DPBS) sans calcium ni magnésium. Aspirer et jeter.
4. Ajouter un volume approprié de solution de digestion trypsique au flacon. S'assurer que la monocouche cellulaire soit entièrement recouverte par la solution de digestion trypsique.
5. Incuber à 37 °C jusqu'à détachement complet des cellules. Observer la monocouche cellulaire au microscope inversé pour vérifier le détachement complet des cellules de la surface du flacon. Tapoter délicatement le flacon pour déloger les cellules si nécessaire.
6. Ajouter 5 à 10 mL de milieu complet préchauffé dans le flacon. Incliner le flacon dans tous les sens pour bien le rincer. Transférer la suspension cellulaire dans un tube conique de 15 mL.
7. Centrifuger à 100 × g pendant 5 à 10 minutes.
8. Jeter le surnageant et remettre en suspension le culot cellulaire avec 2 à 5 mL de milieu complet préchauffé.
9. Déterminer la densité cellulaire viable et le pourcentage de viabilité à l'aide d'un compteur de cellules.
10. Ensemencez, incubez et sous-cultivez selon les protocoles normaux en fonction de votre type cellulaire.
Diluer 10 fois la solution de digestion de trypsine recombinante dans de l'EDTA (facultatif)
La solution de digestion à la trypsine recombinante EDTA (10x) est conçue pour la dissociation des lignées cellulaires adhérentes présentant de fortes propriétés d'adhérence. Cette solution peut également être diluée sélectivement à la concentration souhaitée pour la dissociation de lignées cellulaires diverses sur du matériel plastique. Diluer la solution mère 10x comme suit :
- Préparer une solution mère d'EDTA 100 mM à pH 8,0 (100x). Filtrer (porosité de 0,2 µm) pour stériliser.
- Préparer de manière aseptique le tampon DPBS/EDTA 1 mM en ajoutant 1 mL de solution EDTA 100x (de l'étape 1) à 99 mL de DPBS sans calcium ni magnésium.
- Diluer aseptiquement la solution de digestion de trypsine recombinante 10x à la concentration souhaitée dans un tampon DPBS/EDTA 1 mM.
Notes
- Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants pendant la manipulation.
- Ce produit ne peut être utilisé sur le corps humain.
- Veuillez opérer dans un environnement stérile.