Trypsine recombinante-HYI212
La trypsine clive spécifiquement les liaisons peptidiques C-terminales de la lysine et de l'arginine, ce qui peut dégrader Protéines de liaison intercellulaires. La séquence d'acides aminés de la trypsine recombinante produite par Hyasen Biotech est identique à celle de la trypsine dérivée du pancréas porcin et est produite par expression recombinante dans Escherichia coli. Elle peut remplacer l'extraction traditionnelle de trypsine pour la digestion cellulaire dans les vaccins, les cellules souches, l'immunothérapie cellulaire, le criblage de médicaments, les anticorps et d'autres domaines. L'aprotinine, l'inhibiteur de trypsine de soja, etc., peuvent inhiber significativement l'activité de la trypsine. La trypsine recombinante possède les mêmes propriétés que la trypsine extraite naturellement. Ce produit est fabriqué dans un atelier conforme aux BPF (Bonnes Pratiques de Fabrication). Aucune matière première d'origine animale n'est utilisée lors de la fermentation, de la purification ou de la fabrication du produit final. De plus, les processus de production et de contrôle qualité sont validés, garantissant une grande homogénéité entre les lots.
Composants
| Composants | Taille-1 | Taille 2 | Taille 3 | Taille 4 |
| Trypsine recombinante | 0,1 g | 1 g | 10 g | 100 g |
Stockage
La trypsine recombinante en poudre lyophilisée doit être conservée entre 2 et 8 °C. Elle est stable pendant 24 mois. Après dissolution dans une solution de HCl 1 mM ou de HAC 50 mM, elle doit être conservée entre -25 et -15 °C. Elle conserve son activité après 10 cycles de congélation-décongélation.
Spécification
| CAS | 9002-07-7 |
| CE | 3.4.21.4 |
| Personnage | Puissance cristalline blanche ou blanc cassé |
| Poids moléculaire | 24 kDa |
| point isoélectrique | 8.26 |
| Pureté (RP-HPLC) | β-trypsine ≥ 70,0 % α-Trypsine ≤ 20,0 % |
| Activité spécifique | ≥3800,0U/mg de protéines (BAEE) |
| Activité de la trypsine recombinante | Puissance ≥ 2500,0 U/mg (BAEE) |
| Identification | Violet |
| Biocharge | ≤300 UFC/mL |
| E. coli résidu protéique de la cellule hôte | ≤0,01% |
| E. coli résidus d'ADN de la cellule hôte | ≤10,0000ng/mg |
| Teneur en endotoxines (test LAL) | ≤20,0 UE/mg |
| teneur en protéines | 95,0 % ± 10,0 % |
Définition de l'unité
25 °C, pH 7,6, 3,2 ml de solution réactionnelle (trajet optique de 1 cm), une unité de trypsine (U) a été définie comme une
augmentation de 0,003 de la valeur d'absorption à 253 nm par hydrolyse enzymatique du BAEE par minute.
Contrôle de qualité
- Activité : Détermination de l'activité de la trypsine selon la Pharmacopée de la République populaire de Chine, volume 4 (édition 2020).
- Résidu de protéine de cellule hôte E. Coli : Kit ELISA. Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) - Résidu de protéine de cellule hôte E. Coli (3412).
- Pureté des protéines : Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) - Règles générales pour la méthode HPLC (0512).
- Bioburden : Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (Édition 2020) - Règles générales pour le test de stérilité (1101).
- Résidus d'ADN de la cellule hôte d'E. Coli : Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) Résidus d'ADN de la cellule hôte (3407).
- Teneur en endotoxines : Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) - Règles générales pour le test LAL (1143).
Instructions
- Préparation de la solution : Prélever une quantité appropriée de trypsine en fonction de la teneur en protéines (calculée à partir de l’activité enzymatique et de l’activité protéique) des cellules COA et ajouter une solution d’équilibrage HBSS (ou un autre tampon adapté à la digestion cellulaire). Si nécessaire, ajouter de l’EDTA à une concentration finale de 0 à 1 mM, sans dépasser 2 mM. La concentration de trypsine recommandée est d’environ 0,1 à 0,3 mg/mL (à ajuster selon le type cellulaire). Mélanger délicatement à température ambiante.
- Utilisez un filtre de 0,22 μm pour filtrer la solution de trypsine et transférez-la dans un récipient stérile ; cette étape peut être réalisée à température ambiante.
- La solution de trypsine filtrée doit être utilisée directement selon les besoins le jour même (par exemple, en ajoutant 1 mL à des flacons T25, en digérant les cellules à 37 °C), et le liquide peut être conservé à 2-8 °C pendant 1 à 2 semaines.
- Conservation à long terme : Si la solution de digestion de cellules recombinantes préparée doit être conservée pendant une longue période, elle peut être stockée de manière stable à -25 °C à -15 °C pendant 12 mois.
Utilisation du produit
Pour la culture cellulaire
- Digestion du bloc tissulaire, acquisition des cellules primaires.
- Digestion par passage des cellules adhérentes.
- Culture cellulaire par la méthode des microporteurs.
- Digestion douce des cellules souches.
- Thérapie cellulaire immunitaire, etc.
Pour les protéines recombinantes
- Production d'insuline recombinante.
- Séquençage des protéines, cartographie des peptides.
- Des processus protéolytiques spécifiques tels que la recherche en protéomique.
Avantage du produit
- Aucune origine animale : Production recombinante, sans contamination virale exogène, le processus de production n'utilise aucune matière première animale.
- Haute pureté : Rapport β-trypsine élevé et pureté protéique.
- Meilleur contrôle des processus : faible teneur en protéines de la cellule hôte E. coli, en ADN de la cellule hôte, en charge biologique, en ions métalliques et en endotoxines.
- Qualité stable : La production par lots stables permet d'assurer une production par lots continue ; aucune différence entre les lots.
Notes
- Une forte concentration de sels inorganiques a un effet évident sur l'activité.
- Éviter tout contact avec d'autres produits protéinés.
- Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants pendant la manipulation.