Inhibiteur de RNase HYA311
L'inhibiteur de RNase est un inhibiteur de RNase murin recombinant, exprimé et purifié à partir d'Escherichia coli. Il se lie aux RNases A, B ou C selon un rapport 1:1 par des liaisons non covalentes, inhibant ainsi l'activité de ces trois enzymes et protégeant l'ARN de la dégradation. Cependant, il est inefficace contre la ribonucléase I, la ribonucléase T1, la nucléase S1, la ribonucléase H et les ribonucléases d'Aspergillus. Les inhibiteurs de RNase ont été testés par RT-PCR, RT-qPCR et IVT-ARNm, et sont compatibles avec diverses transcriptases inverses commerciales, diverses ADN polymérases et ARN polymérases. Contrairement aux inhibiteurs de RNase humains, les inhibiteurs de RNase murins ne contiennent pas deux cystéines très sensibles à l'oxydation ; ils présentent donc des propriétés antioxydantes supérieures et sont stables à de faibles concentrations de DTT (inférieures à 1 mM). Cette caractéristique la rend adaptée aux réactions où des concentrations élevées de DTT ne peuvent pas être ajoutées (par exemple, RT-PCR en temps réel).
Composants
| Composant | 2 À | 20 KU | 400 KU |
| Inhibiteur de RNase ( 40U/µL ) | 50 µL | 500 μL | 10 mL |
Stockage
À conserver entre -25°C et -15°C, valable 2 ans.
Définition de l'unité
Une unité d'activité (U) est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour inhiber 50 % de l'activité de 5 ng de RNase A.
Contrôle de qualité
1. Activité exonucléasique: 40 U de ce produit et 1 μg d'ADN digéré par λ-Hind III ont réagi à 37℃ pendant 16 heures, et la bande électrophorétique de l'ADN n'a pas changé ;
2. Activité endonucléasique: 40 U de ce produit et 1 μg d'ADN λ ont réagi à 37℃ pendant 16 heures, et la bande électrophorétique de l'ADN n'a pas changé ;
3. Nickaseactivité: 40 U de ce produit et 1 μg de pBR322 ont réagi à 37℃ pendant 16 heures, et la bande électrophorétique de l'ADN n'a pas changé ;
4. Activité RNase: 40 U de ce produit et 1,6 μg d'ARN MS2 ont réagi à 37℃ pendant 4 heures, et la bande électrophorétique n'a pas changé ;
5. E. coli détection des résidus d'ADNL'acide nucléique restant dans 40 U de ce produit a été détecté par qPCR TaqMan spécifique à E. coliADNr 16S. Détection, E. colirésidu génomique ≤ 0,1 pg/40 U.
Applications
Ce produit peut être largement utilisé dans toute expérience où une interférence de la RNase peut exister afin d'éviter la dégradation de l'ARN, comme par exemple :
1. Synthèse du premier brin d'ADNc, RT-PCR, RT-qPCR, etc. ;
2. Protéger l'ARN de la dégradation pendant la transcription/traduction in vitro (comme dans un système de réplication virale in vitro) ;
3. Inhiber l'activité de la RNase pendant la séparation et la purification de l'ARN.
Notes
1. Une agitation ou un brassage violent entraînera l'inactivation de l'enzyme ;
2. La température active de l'inhibiteur est de 25 à 55 °C, et il sera inactivé à une température de ≥ 65 °C ;
3. Il n'inhibe pas l'activité de la RNase H, de la RNase 1 et de la RNase T1 ;
4. La plage de pH pour inhiber l'activité de la RNase est relativement large (elle est active à un pH de 5 à 9), et elle présente une activité maximale à un pH de 7 à 8.