Inhibiteur de RNase HYJ220
Les inhibiteurs de RNase sont des inhibiteurs de RNase murins recombinants, exprimés et purifiés chez Escherichia coli. Ils se lient aux RNases A, B ou C dans un rapport 1:1 par liaison non covalente, inhibant ainsi l'activité de ces trois enzymes et protégeant l'ARN de la dégradation. Cependant, ils sont inefficaces contre les RNases I, T1, S1, H et les ribonucléases d'Aspergillus. Les inhibiteurs de RNase ont été testés par RT-PCR, RT-qPCR et IVT-ARNm et sont compatibles avec diverses transcriptases inverses commerciales et diverses ADN et ARN polymérases. Contrairement aux inhibiteurs de RNase humains, les inhibiteurs de RNase murins sont dépourvus de deux cystéines, très sensibles à l'oxydation, ce qui leur confère une meilleure résistance à l'oxydation et une stabilité accrue à de faibles concentrations de DTT (inférieures à 1 mM). Cette caractéristique les rend particulièrement adaptés aux réactions ne pouvant être réalisées avec de fortes concentrations de DTT, comme la RT-PCR en temps réel.
Composants
| Composants | 10KU | 40KU | 400KU | 4000KU |
| Inhibiteur de RNase (40U/μL) | 0,25 mL | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C. Se conserve 2 ans (éviter les cycles de congélation-décongélation répétés).
tampon de stockage
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6 à 25 °C), 8 mM DTT et 50 % de glycérol.
Définition de l'activité
Une unité d'activité (U) est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour inhiber 50 % de l'activité de 5 ng de RNase A.
Contrôle de qualité
1. Activité exonucléase :Lorsque 40 U de ce produit ont réagi avec 1 μg d'ADN digéré par λ-Hind III à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
2. Activité endonucléase : Lorsque 40 U de ce produit ont réagi avec 1 μg d'ADN λ à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
3. Activité de la nickase : Lorsque 40 U de ce produit ont réagi avec 1 μg de pBR322 à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
4. Activité RNase : Lorsque 40 U de ce produit ont réagi avec 1,6 μg d'ARN MS2 à 37 °C pendant 4 heures, la bande électrophorétique est restée inchangée.
5. ADN résiduel d'E. coli : L'acide nucléique résiduel dans 40 U de ce produit a été détecté par qPCR TaqMan spécifique de l'ADNr 16S d'E. coli, et le résidu génomique d'E. coli était ≤ 0,1 pg/40 U.
6. Endotoxine : Test LAL, Pharmacopée chinoise édition 2020, Partie IV, Test de limite de gel, Règles générales (1143), teneur en endotoxines bactériennes ≤ 10 UE/mg.
Applications
Ce produit peut être largement utilisé dans toute expérience où une interférence de la RNase peut se produire afin d'empêcher la dégradation de l'ARN, comme par exemple :
1. Synthèse d'ADNc de premier brin, RT-PCR, RT-qPCR, etc. ;
2. Protéger l'ARN de la dégradation pendant la transcription/traduction in vitro (comme dans les systèmes de réplication virale in vitro) ;
3. Inhibition de l'activité RNase pendant l'isolement et la purification de l'ARN.