Mélange maître colorimétrique RT-LAMP HYB411
Ce produit contient un tampon de réaction, un mélange d'enzymes RT (ADN polymérase Bst et transcriptase inverse thermorésistante), des protecteurs lyophilisés et des colorants chromogènes. Pour l'utiliser, il suffit d'ajouter le tampon, le mélange d'enzymes et d'amorces, puis de l'incorporer à la matrice. L'ajout du protecteur lyophilisé est direct. Après lyophilisation, seuls les amorces et la matrice sont ajoutés au moment de l'utilisation. Ce kit permet une détection visuelle rapide et claire de l'amplification : une réaction négative apparaît en rouge et une réaction positive en jaune.
Composants
| Composants | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Tampon d'amplification à médiation par boucle (avec colorant) | 0,96 mL | 4,8 mL × 2 | 9,6 mL × 10 |
| Mélange d'enzymes RT | 270 μL | 2,7 mL | 2,7 mL × 10 |
| protecteur lyophilisé | 0,96 mL × 2 | 9,6 mL × 2 | 9,6 mL × 20 |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C, valable 12 mois.
Instructions
1. Décongeler le tampon de réaction à température ambiante. Vortexer brièvement ou retourner les tubes plusieurs fois pour bien mélanger, puis centrifuger pour récupérer le liquide au fond du tube.
2. Préparation du système réactionnel : ce réactif peut être préparé dans deux systèmes réactionnels, un mélange réactionnel liquide et un mélange de système de lyophilisation.
1) Préparer le mélange réactionnel liquide
| Composants | Volume |
| Tampon d'amplification à médiation par boucle (avec colorant) | 10 μL |
| Mélange d'enzymes RT | 2,8 ml |
| Mélange d'apprêt 10×* | 5 ml |
| ADN/ARN matrice** | x μ L |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
2) Mélange pour système de lyophilisation
① Préparer le mélange pour la lyophilisation
| Composants | Volume |
| Tampon d'amplification à médiation par boucle (avec colorant) | 10 μL |
| protecteur lyophilisé | 20 μL |
| Mélange d'enzymes RT | 2,8 μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
② Lyophilisation
Le mélange préparé a été lyophilisé dans un système de 50 μL.
③ Préparer le mélange réactionnel
| Composants | Volume |
| Mélange lyophilisé | 1 pièce |
| Mélange d'apprêt 10×* | 5 ml |
| ADN/ARN matrice** | x μ L |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
*10 × Concentration du mélange d'amorces : 16 μMFIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B ;
**Le DEPC (soluble dans l'eau) est recommandé pour le modèle d'acide nucléique.
3. Incuber à 65 °C pendant 30 à 45 minutes, durée qui peut être prolongée en fonction du temps de réaction du changement de couleur.
4. À l'œil nu, le jaune était positif et le rouge négatif.
Pasest
1. Du sel peut apparaître au fond du tube tampon ; vortexez brièvement ou retournez les tubes plusieurs fois pour bien mélanger à température ambiante.
2. La température de réaction peut être optimisée entre 62 ℃ et 68 ℃ en fonction des conditions des amorces.
3. Les réactifs conditionnés ne doivent pas être exposés à l'air pendant une période prolongée.
4. La réaction de décoloration rouge et jaune dépend des variations de pH du milieu réactionnel. Veuillez ne pas utiliser de solution de conservation d'acide nucléique contenant du Tris ; il est recommandé d'utiliser de l'eau distillée.2O acide nucléique stocké ;
5. L'expérience doit être standardisée, y compris la préparation du système réactionnel, la lyophilisation, le traitement des échantillons et le processus d'ajout des échantillons ;
6. Pour éviter toute contamination, il est recommandé de préparer le système réactionnel dans une enceinte ultra-propre, ou d'ajouter des gabarits à la hotte de la pièce pour éviter les fausses interférences positives.