Mélange maître fluorescent RT-LAMP HYB413
Ce produit contient un tampon de réaction, un mélange d'enzymes RT (ADN polymérase Bst et transcriptase inverse thermorésistante), un agent protecteur lyophilisé et des colorants fluorescents. Le tampon de réaction contient du magnésium (Mg).2+Pour l'amplification, les utilisateurs peuvent mélanger directement le tampon de réaction, le mélange d'enzymes RT, le colorant fluorescent et l'amorce, puis ajouter la matrice. Au besoin, ils peuvent ajouter le protecteur lyophilisé pour préparer un système lyophilisable.
Composants
| Composants | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Tampon d'amplification à boucle | 1,2 mL | 4 mL × 3 | 12 mL × 10 |
| Mélange d'enzymes RT | 245 μL | 2,45 mL | 2,45 mL × 10 |
| protecteur lyophilisé | 0,96 mL × 2 | 9,6 mL × 2 | 9,6 mL × 20 |
| 25× Teinture | 192 μL | 0,96 mL × 2 | 0,96 mL×20 |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C, valable 12 mois.
Instructions
1. Décongeler le tampon de réaction à température ambiante. Vortexer brièvement ou retourner les tubes plusieurs fois pour bien mélanger, puis centrifuger pour récupérer le liquide au fond du tube.
2. Préparation du système réactionnel : ce réactif peut être préparé dans deux systèmes réactionnels, un mélange réactionnel liquide et un mélange de système de lyophilisation.
1) Préparer le mélange réactionnel liquide
| Composants | Volume |
| Tampon d'amplification à boucle | 12,5 μL |
| 25× Teinture | 2 μL |
| Mélange d'enzymes RT | 2,55 μL |
| Mélange d'apprêt 10×* | 5 μL |
| ADN/ARN matrice** | x μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
2) Mélange pour système de lyophilisation
① Préparer le mélange pour la lyophilisation
| Composants | Volume |
| Tampon d'amplification à boucle | 12,5 μL |
| protecteur lyophilisé | 20 μL |
| 25× Teinture | 2 μL |
| Mélange d'enzymes RT | 2,55 μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
② Lyophilisation
Le mélange préparé a été lyophilisé dans un système de 50 μL.
③ Préparer le mélange réactionnel
| Composants | Volume |
| Mélange lyophilisé | 1 pièce |
| Mélange d'apprêt 10×* | 5 ml |
| ADN/ARN matrice** | x μ L |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
*10 × Concentration du mélange d'amorces : 16 μMFIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B ;
**Le DEPC (soluble dans l'eau) est recommandé pour le modèle d'acide nucléique.
3. Programme de réaction
Configurez les paramètres de l'instrument PCR (tel que l'ABI7500) comme suit :
| Température | Temps | Cycles |
| 65℃ | années 60 *Collecte du signal fluorescent | 30 |
Notes
1. Du sel peut apparaître au fond du tube tampon ; vortexez brièvement ou retournez les tubes plusieurs fois pour bien mélanger à température ambiante.
2. La température de réaction peut être optimisée entre 62°C et 68°C en fonction des conditions initiales.
3. L'expérience doit être menée de manière standardisée, y compris la préparation du système réactionnel, le traitement de l'échantillon et l'ajout de l'échantillon.
4. Il est suggéré de préparer le système de réaction sur la table ultra-propre et d'ajouter des gabarits dans la hotte des autres pièces pour éviter les erreurs.