Mélange maître pour sonde RT-LAMP HYB415
Ce produit contient un tampon de réaction, de la polymérase d'ADN Bst, un mélange d'enzymes RT (transcriptase inverse thermostable) et des composants protecteurs lyophilisés. Le tampon de réaction contient du magnésium (Mg).2+Ce réactif contient des dNTP et d'autres composants nécessaires à l'amplification. Son utilisation est simple : il suffit de mélanger le tampon, l'enzyme de réaction, l'amorce et la matrice. Il peut également servir à préparer un système de réaction lyophilisé. Après ajout de l'agent protecteur lyophilisé, le mélange peut être directement lyophilisé. Dans ce cas, il suffit d'ajouter l'amorce et la matrice. Ce réactif offre une efficacité et une sensibilité d'amplification élevées.
Composants
| Composants | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Tampon d'amplification à boucle | 1 mL | 2,5 mL × 4 | 10 mL × 10 |
| Mélange d'enzymes RT | 360 μL | 3,6 mL | 3,6 mL × 10 |
| Lyoprotectant | 1 mL | 2,5 mL × 4 | 10 mL × 10 |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C, valable 12 mois.
Instructions
1. Sortez le tampon et laissez-le décongeler. Vortexez-le soigneusement avant utilisation et centrifugez brièvement pour récupérer le liquide au fond du tube.
2. Préparation du système réactionnel : Ce réactif dispose de deux types de systèmes réactionnels : un système réactionnel liquide et un système réactionnel lyophilisé. Veuillez choisir en fonction de l'utilisation spécifique.
1) Préparation du système de réaction liquide
| Composant | Volume |
| Tampon d'amplification à boucle | 10 µL |
| Mélange d'enzymes RT | 3,6 μL |
| Mélange de sondes d'amorces 10×* | 5 μL |
| ARN matrice** | X μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
2) Préparation du système réactionnel lyophilisé
① Préparation du système lyophilisé
| Composant | Volume |
| Tampon d'amplification à boucle | 10 µL |
| Lyoprotectant | 10 µL |
| Mélange d'enzymes RT | 3,6 μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 25 μL |
② Lyophilisation
Lyophilisez le mélange préparé selon le système 25 μL.
③ Préparation du système réactionnel
| Composant | Volume |
| Produits lyophilisés | 1 pièce |
| Mélange de sondes d'amorces 10×* | 5 μL |
| ARN matrice** | x μL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 μL |
*Concentration du mélange d'amorces 10× : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B, 4 μM sonde ;
**Il est recommandé de dissoudre la matrice d'acide nucléique dans de l'eau DEPC.
3. Réaction d'amplification
Configurez le programme suivant sur un instrument de PCR fluorescent (tel que ABI7500, etc.).
| Température | Temps | Cycles |
| 65℃ | années 60 *Collecter la fluorescence FAM | 30 |
Notes
1. Une fois le tampon fondu, un précipité blanc peut se former ; celui-ci peut être clarifié en mélangeant soigneusement à température ambiante ;
2. La température de réaction peut être optimisée entre 62℃ et 68℃ en fonction de la situation de l'amorce ;
3. L'expérience doit être menée de manière standardisée, y compris la préparation du système réactionnel, la lyophilisation, le traitement de l'échantillon et l'ajout de l'échantillon.