Super Ultra Nucléase-HYI222
La Super Ultra Nuclease est une endonucléase génétiquement modifiée, dérivée de Serratia marcescens, capable de dégrader l'ADN ou l'ARN, double ou simple brin, linéaire ou circulaire, dans une large gamme de conditions, et de dégrader complètement les acides nucléiques en oligonucléotides 5'-monophosphates de 3 à 5 bases. Après modification génétique, le produit a été fermenté, exprimé et purifié dans E. coli, ce qui réduit la viscosité du surnageant et du lysat cellulaires pour la recherche scientifique, tout en améliorant l'efficacité de purification et l'étude fonctionnelle des protéines. Elle peut également être utilisée en thérapie génique, purification de virus, production de vaccins et dans l'industrie pharmaceutique des protéines et des polysaccharides comme réactif d'élimination des acides nucléiques résiduels de l'hôte. Ce produit ne contient aucune étiquette, ce qui le rend particulièrement adapté à l'élimination des acides nucléiques des protéines recombinantes marquées.
Composants
| Composants | 10 KU | 100KU | 500KU | 5000KU |
| Super Ultra Nucléase | 16 μL | 160 μL | 0,8 mL | 8 mL |
Caractéristiques du produit
| N° CAS | 9025-65-4 |
| N° CE | 3.1.30.2 |
| Poids moléculaire | 30 kDa |
| Point isoélectrique | 6,85 |
| Pureté des protéines | ≥99 % (SDS-PAGE et HPLC) |
| Température optimale | 37°C |
| pH optimal | 8.0 |
| Activité protéasique | négatif |
| Biocharge |
|
| Protéines résiduelles de la cellule hôte | ≤10 ppm |
| Heavy Metal | ≤10 ppm |
| Endotoxine bactérienne |
|
| Tampon de stockage | Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl₂ 2 mM2, 20 mM NaCl, glycérol à 50 % |
Stockage
Transport à ≤0°C ; stockage à -25~-15°C, durée de conservation de 2 ans (éviter le gel-décongélation)
Définition de l'unité
La quantité d'enzyme utilisée pour modifier la valeur d'absorption de A260 de 1,0 en 30 min à 37 °C, pH 8,0, équivalente à 37 μg d'ADN de sperme de saumon digéré en coupant en oligonucléotides, a été définie comme une unité active (U).
Contrôle de qualité
- Protéines résiduelles de la cellule hôte : kit ELISA
- Résidus de protéase : 625 KU/mL de Super Ultra Nuclease ont réagi avec le substrat pendant 60 min, aucune activité n'a été détectée.
- Endotoxines bactériennes : test LAL, Pharmacopée de la République populaire de Chine, volume 4 (édition 2020), méthode d’essai de limite de gel. Règles générales (1143).
- Bioburden : Pharmacopée de la République populaire de Chine Volume 4 (édition 2020) — Règles générales pour le test de stérilité (1101), norme nationale de la RPC, GB 4789.2-2016.
- Métal lourd : ICP-AES, HJ776-2015.
Opération
- L'activité de l'UltraNuclease a été significativement inhibée lorsque la concentration de SDS était supérieure à 0,1 % ou lorsque la concentration d'EDTA était supérieure à 1 mM.
- Les tensioactifs Triton X-100, Tween 20 et Tween 80 n'ont eu aucun effet sur les propriétés de la nucléase lorsque la concentration était inférieure à 1,5 %.
| Opération | Fonctionnement optimal | Opération valide |
| Température | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg 2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-Mercaptoéthanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Ion métallique monovalent (Na +，K+ etc.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| APRÈS4 3- | 0-10 mM | 0-100 mM |
« Optimal » est défini comme la condition dans laquelle UltraNuclease conserve > 90 % de son activité. « Efficace » est défini comme la condition dans laquelle UltraNuclease conserve > 15 % de son activité.
Utilisation et dosage
- Éliminer les acides nucléiques exogènes des vaccins, réduire le risque de toxicité résiduelle des acides nucléiques et améliorer la sécurité des produits.
- Réduire la viscosité du liquide d'alimentation causée par l'acide nucléique, raccourcir le temps de traitement et augmenter le rendement en protéines.
- Éliminer l'acide nucléique qui enveloppe la particule (virus, corps d'inclusion, etc.), ce qui favorise la libération et la purification de la particule.
- Le traitement par nucléase peut améliorer la résolution et la récupération de l'échantillon pour la chromatographie sur colonne, l'électrophorèse et l'analyse par transfert.
- En thérapie génique, l'acide nucléique est éliminé pour obtenir des virus adéno-associés purifiés.
| Type expérimental | Production de protéines | Virus, vaccin | Médicaments cellulaires |
| Nombre de cellules | 1 g de poids humide de cellules (remises en suspension) avec 10 ml de tampon) | fermentation de 1 L Surnageant liquide | Culture de 1 L |
| Dosage minimum | 250U | 100U | 100U |
| Dosage recommandé | 2500U | 25000U | 5000U |
| Temps de fonction | Réaction recommandée à 37 °C pendant 15 à 60 minutes, ou réaction à 25 °C pendant 30 à 120 min | ||
Si la solution est très saline, acide ou alcaline, ou si elle présente une forte concentration de détergent dénaturant, il convient d'augmenter la quantité d'enzyme ou de prolonger le temps d'incubation.
Notes
- Le stockage d'UltraNuclease à 4 °C pendant deux semaines n'affecte pas son activité biologique ; un stockage à long terme à 4 °C n'est pas recommandé.
- Éviter la congélation-décongélation à -80 °C, stockage recommandé entre -25 et -15 °C.
- Éviter toute contamination par contact avec d'autres enzymes utilisées en diagnostic moléculaire lors de l'application.
- Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants.