Prémélange qPCR Superstart Probe plus-UNG HYA422
détails du produit
Le Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG est un réactif spécialisé conçu pour les réactions de PCR en temps réel (RT-qPCR) qualitatives et quantitatives utilisant la méthode basée sur des sondes. Il contient la Superstart Taq plus, une nouvelle enzyme à démarrage à chaud dont l'activité polymérase Taq est bloquée à température ambiante. Cette enzyme inhibe efficacement l'amplification non spécifique due à l'hybridation non spécifique des amorces ou à la formation de dimères d'amorces à basse température. Ceci améliore la spécificité des réactions d'amplification et garantit des résultats de détection plus stables, même pour des concentrations d'ADN matrice ultra-faibles. Formulé avec un tampon optimisé spécifique à la qPCR et un système anti-contamination UNG/dUTP, ce réactif génère d'excellentes courbes standard sur une large gamme de quantification, permettant une quantification précise. Il prévient efficacement les faux positifs induits par la contamination croisée avec le produit de PCR et par les aérosols. Ce réactif est compatible avec les instruments de PCR en temps réel de la plupart des fabricants, notamment Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad et Roche.
Composants
2×Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG
Ce réactif contient déjà Superstart Taq plus, UNG, un tampon PCR et du MgCl₂.2, dNTP, stabilisateurs et autres composants.
Stockage
À conserver à -20 °C pour une conservation à long terme ; stable pendant 3 mois à 4 °C. Bien mélanger avant utilisation et éviter les cycles de congélation-décongélation répétés.
Instructions
1. Système réactionnel
| Composants | 25 µL Volume | Volume de 50 µL | Concentration finale |
| 2×Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG | 12,5 µL | 25 µL | 1× |
| Mélange amorce-sonde 25×* | 1 µL | 2 µL | 1× |
| ADN matrice** | - | - | - |
| ddH2LE | Jusqu'à 25 µL | Jusqu'à 50 µL | - |
En général, une concentration finale d'amorces de 0,2 μM donne des résultats satisfaisants ; si la réaction ne donne pas satisfaction, la concentration d'amorces peut être ajustée entre 0,2 et 1 μM. La concentration de sonde est généralement optimale entre 0,1 et 0,3 μM. Des expériences de gradient de concentration peuvent être réalisées pour identifier la combinaison optimale d'amorces et de sondes.
Le nombre de copies du gène cible varie selon le type de matrice d'ADN. Si nécessaire, des dilutions en série peuvent être effectuées pour déterminer la quantité optimale de matrice d'ADN à ajouter.
2. Programme de réaction
| Sétape | Ttempérature | Temps | Cycles |
| Digestion | 50℃ | 2 min | 1 |
| Prédénaturation | 95℃ | 1 à 5 min | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 10-20 s | 40-50 |
| Recuit et extension | 56~64℃ | 20-60 s |
Contrôle de qualité
1. Tests fonctionnels : sensibilité, spécificité et répétabilité de la qPCR.
2. Exempt d'activité nucléasique exogène, ainsi que de contamination par des endonucléases et des exonucléases exogènes.
Informations techniquesrmation
1. Le prémélange Superstart Probe qPCR plus-UNG intègre une nouvelle enzyme de démarrage à chaud, permettant un démarrage rapide en 1 à 5 minutes. Formulé avec un système tampon spécialement optimisé, il est compatible avec les réactions PCR multiplex en temps réel.
2. Il présente une spécificité accrue et améliore considérablement la sensibilité de détection en PCR en temps réel. Il en résulte une nette amélioration de la normalisation des courbes d'amplification et des valeurs de fluorescence pour les matrices à très faible concentration, ce qui le rend adapté à une utilisation comme réactif de détection en PCR en temps réel haute sensibilité.
3. Pour les amorces avec des températures d'hybridation basses ou l'amplification de longs fragments dépassant 200 pb, le protocole PCR en trois étapes est recommandé.
4. L’efficacité d’utilisation du dUTP et la sensibilité à l’enzyme UNG varient selon les gènes cibles. Par conséquent, si l’utilisation du système UNG entraîne une diminution de la sensibilité de détection, le système réactionnel doit être ajusté et optimisé en conséquence.
5. Utilisez des zones et des pipettes dédiées aux étapes de pré- et post-amplification. Portez des gants et changez-les fréquemment. N’ouvrez pas les tubes de réaction après la PCR afin de minimiser la contamination des échantillons par les produits d’amplification.
6. À usage de recherche uniquement !