ADN polymérase Taq Superstart M3 HYA117
La polymérase d'ADN Taq Superstart M3 est un mutant de troisième génération de Taq à démarrage à chaud médié par un anticorps, spécialement conçu pour une PCR rapide et une résistance aux inhibiteurs de PCR courants tels que ceux trouvés dans les échantillons humains (sang, expectorations, urine et selles), ainsi qu'aux inhibiteurs de transfert provenant de la préparation des échantillons.
1. L'enzyme est stable à 15-25°C pendant plusieurs heures, en fonction de la composition de la solution de travail finale, et convient donc à une utilisation dans des processus automatisés.
2. La polymérase d'ADN Taq Superstart M3 conserve l'activité exonucléase 5′→3′, permettant une qPCR basée sur une sonde ou un colorant pour les types d'échantillons de routine et difficiles.
3. La formulation sans glycérol rend la Superstart Taq DNA Polymerase M3 adaptée à la préparation de mélanges d'amplification séchés.
Composants
ADN polymérase Taq Superstart M3 (sans glycérol), 30 U/µL
Stockage
À conserver entre -15 et -25 °C. Éviter les cycles répétés de congélation et de décongélation (plus de 5 fois).
Instruction
1. Système de réaction
| Composants | Volume | Concentration dans le mélange maître |
| Tampon PCR 2× contenant du MgCl₂2* | 10 µL | 1× MgCl23-4,5 mM |
| Mélange d'apprêt 20×** | 1 μL | 1× |
| Mélange de sonde 20×*** | 1 μL | 1× |
| ADN polymérase Taq Superstart M3 | 1 μL | PCR 0,02 U ou 0,04 U/µL |
| matrice d'ADN | 5 μL | / |
| ddH2LE | 2 µL | / |
| Total | 20 µL | / |
Les concentrations optimales d'amorces se situent entre 200 et 500 nM (concentration finale). La concentration d'amorces peut être optimisée en faisant varier la concentration finale de 200 à 500 nM par incréments de 100 nM.
**Les concentrations appropriées de sondes telles que les sondes d'hydrolyse varient de 50 à 500 nM (concentration finale). La concentration de la sonde peut être optimisée en faisant varier la concentration finale de 50 à 500 nM par incréments de 100 nM.
***MgCl approprié2La concentration varie de 3 à 4,5 mM. Une concentration plus élevée de MgCl2 La concentration permet une meilleure tolérance aux inhibiteurs.
2. Programme de réaction
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| Prédénaturation | 98 °C | 30 s à 5 min* | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 1s-1min | 45** |
| Extension de recuit | 50~65℃*** | 1s-1min | |
| Refroidissement | 40 °C | 10 s | 1 |
*Effectuer une prédénaturation de 3 minutes à 98 °C pour garantir la dénaturation complète de l'ADN cible complexe. Une durée de prédénaturation allant jusqu'à 10 minutes peut être nécessaire pour certains échantillons bruts.
Pour la plupart des analyses, 45 cycles sont appropriés. Si l'analyse présente des courbes d'amplification abruptes et des points de croisement précoces, 40 cycles devraient suffire. La réduction du nombre de cycles améliore l'homogénéité du produit et diminue la durée de l'analyse.
***Selon la température d'hybridation de l'amorce. Un temps d'hybridation/extension/acquisition de données de 10 s peut être utilisé pour la plupart des analyses ; il convient de l'augmenter à 30 s/kb jusqu'à 1 min/kb pour les amplicons ou matrices difficiles. Ce temps doit être déterminé empiriquement. Pour les amplicons courts ≤ 100 pb, un temps de dénaturation et d'extension de 1 s peut être préférable.
Application
Pour une PCR rapide et résistante aux inhibiteurs. Formulé sans glycérol pour la préparation de mélanges d'amplification lyophilisés.
Notes
1. Utilisez des techniques sans nucléase ; les réactifs et les récipients de réaction contaminés par des nucléases peuvent dégrader l'ADN matrice.
2. Portez des gants jetables et changez-les fréquemment.
3. Évitez de toucher des surfaces ou des matériaux susceptibles de provoquer une contamination par la nucléase.
4. Nettoyer et décontaminer les zones de travail et les instruments, y compris les pipettes, avec des réactifs de décontamination disponibles dans le commerce.
5. Utilisez uniquement des embouts de pipettes neufs, sans nucléase et bloquant les aérosols.
6. Utilisez une zone de travail spécifiquement désignée pour le travail sur les acides nucléiques et, si possible, utilisez des récipients de réaction et des pipettes dédiés uniquement au travail avec l'acide nucléique matrice.