ARN polymérase T7 HYJ211
L'ARN polymérase T7 est une ARN polymérase ADN-dépendante dérivée du bactériophage T7. Elle possède une activité ARN polymérase 5'→3' très spécifique. L'ARN polymérase T7 est hautement spécifique du promoteur T7 et peut synthétiser de grandes quantités d'ARN en utilisant la séquence en aval de ce promoteur comme matrice.
Composants
| Composants | 5KU | 50KU | 500KU | 5000KU |
| ARN polymérase T7 (50 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
| Tampon 10×HH T7 | 2 × 0,1 mL | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 100 mL |
Stockage
Transporter à une température inférieure à 0 °C ; conserver entre -25 et -15 °C. Durée de conservation : 24 mois.
tampon de stockage
Tris-HCl 50 mM, NaCl 100 mM, β-mercaptoéthanol 20 mM, EDTA 1 mM, glycérol 50 %, Triton X-100 0,1 % (p/v), pH 7,9 à 25 °C
Définition de l'activité
Une unité d'activité (U) est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour catalyser la conversion du NTP en 1 nmol de PPi dans un système de réaction standard à 37°C en 1 heure.
Contrôle de qualité
1. Détection des résidus d'endonucléase : 50 U de cette enzyme et 1 μg d'ADN λ ont été ajoutés à un système réactionnel de 50 μL et incubés à 37 °C pendant 16 heures. Les bandes d'ADN observées par électrophorèse sur gel d'agarose sont restées inchangées.
2. Détection des résidus d'exonucléase : 50 U de cette enzyme et 1 μg d'ADN digéré par λ-Hind III ont été ajoutés à un système réactionnel de 50 μL et incubés à 37 °C pendant 16 heures. Les bandes d'ADN observées par électrophorèse sur gel d'agarose sont restées inchangées.
3. NickaseDétection des résidus : 50 U de cette enzyme et 1 μg d'ADN pBR322 ont été ajoutés à un système réactionnel de 50 μL et incubés à 37 °C pendant 16 heures. Les bandes d'ADN observées par électrophorèse sur gel d'agarose sont restées inchangées.
4. Test de résidus de RNase : Ajouter 50 U de cette enzyme et 1,6 μg d'ARN MS2 à un volume réactionnel de 50 μL et incuber à 37 °C pendant 16 heures. Les bandes d'ARN observées par électrophorèse sur gel d'agarose restent inchangées.
5. Inactivation par la chaleur : 75°C pendant 10 minutes.