Taq ADN polymérase HYA110
La Taq ADN polymérase est une ADN polymérase hautement thermostable dérivée de la bactérie thermophile Thermus aquaticus. La réaction enzymatique nécessite la participation de Mg²⁺.2+Elle peut catalyser la polymérisation des désoxynucléotides dans le sens 5' → 3', en fonction de la matrice d'ADN. La Taq ADN polymérase développée par notre société est une protéine enzymatique de haute pureté, obtenue par expression recombinante du gène de la Taq ADN polymérase de Thermus aquaticus dans Escherichia coli et purifiée par chromatographie en plusieurs étapes. Elle possède les mêmes propriétés que la Taq ADN polymérase naturelle.
Composants
1. 5U/µL d'ADN polymérase aq
2. Tampon PCR 10× (Mg2+ gratuit) (facultatif)
3. 25 mMgCl2(facultatif)
Tampon PCR 10× (Mg2+ (sans) ne contient pas de dNTP ni de Mg2+Veuillez ajouter des dNTP et du MgCl₂.2lors de la préparation du système réactionnel.
Activité Définition
Une unité d'activité (U) est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 10 nmol de désoxynucléotides dans un matériau insoluble dans l'acide, en utilisant l'ADN de sperme de saumon activé comme matrice/amorce, dans les conditions de 74℃ pendant 30 minutes.
Stockage
Conserver à -20 °C pour une conservation à long terme. Bien mélanger avant utilisation et éviter les cycles de congélation-décongélation répétés.
Contrôle de qualité
1. Pureté électrophorétique par SDS-PAGE ≥ 98 %.
2. Sensibilité à l'amplification, variation inter-lots et stabilité.
3. Exempt d'activité nucléasique exogène, ainsi que de contamination par des endonucléases et des exonucléases exogènes.
Instructions
1. Système de réaction PCR
| Composants | Volume | Concentration dans le mélange maître |
| Tampon PCR 10× (Mg2+gratuit)* | 5 µL | 1× |
| dNTP (10 mM de chaque dNTP) | 1 μL | 200 µM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/µL de Taq ADN polymérase | 0,25-0,5 μL | 1,25-2,5 U |
| Mélange d'apprêt 25×** | 2 μL | 1× |
| Modèle | — — |
|
| ddH2LE | Jusqu'à 50 µL | — — |
*Le tampon PCR 10 × ne contient pas de dNTP ni de Mg²⁺ et doit être complété avec des dNTP et du MgCl₂ avant utilisation.
**Pour les qPCR/qRT-PCR, une sonde fluorescente doit être ajoutée au système réactionnel. Une concentration finale d'amorces de 0,2 μM donne généralement des résultats optimaux ; si les performances de la réaction sont insuffisantes, la concentration d'amorces peut être ajustée entre 0,2 et 1 μM. La concentration de sonde est généralement optimale entre 0,1 et 0,3 μM. Des expériences de gradient de concentration peuvent être réalisées pour identifier la combinaison optimale d'amorces et de sondes.
2. Réaction Programme
| Trois-méthode par étapes | |||
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| Prédénaturation | 95 °C | 30 s | 1 |
| Dénaturation | 95 °C | 10-20 s | 35-50 |
| recuit | 56~64℃ | 10-30 s | |
| Extension | 72℃ | 10-60 s | |
Spécifications techniques
1. Elle possède une activité polymérase 5'-3' et une activité exonucléase 5'-3' ; elle ne possède aucune activité exonucléase 3'-5' ni fonction de relecture.
2. À 70~75℃, le taux d'extension est de 1~2 kb/min.
3. L'extrémité 3' du produit PCR est A, et le produit peut être directement cloné dans un vecteur T.
4. Il convient à la détection qualitative et quantitative des PCR et RT-PCR ordinaires.
5. Il convient à la détection par PCR quantitative en fluorescence, au séquençage de l'ADN, etc.
6. À usage de recherche uniquement !