Nucléase Ultra de qualité GMP
L'UltraNuclease de qualité BPF est exprimée et purifiée dans Escherichia coli (E. coli) par génie génétique et préparée dans des conditions conformes aux BPF. Elle permet de réduire la viscosité du surnageant et du lysat cellulaires utilisés en recherche scientifique, d'accroître l'efficacité de la purification des protéines et d'améliorer l'étude fonctionnelle des protéines. Ce produit permet également de réduire la quantité de résidus d'acides nucléiques de l'hôte à un niveau de l'ordre du picogramme, améliorant ainsi les performances et la sécurité des produits biologiques pour des applications telles que la purification de virus, la fabrication de vaccins et la production de produits pharmaceutiques à base de protéines et de polysaccharides. De plus, il peut être utilisé pour prévenir l'agrégation des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) humaines dans le cadre de la thérapie cellulaire et du développement de vaccins.
L'UltraNuclease est fournie sous forme de réactif stérilisé, élué dans un tampon (Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl₂ 2 mM, NaCl 20 mM, glycérine 50 %), et se présente sous forme de liquide incolore et transparent. Ce produit est fabriqué selon les exigences des BPF et est fourni sous forme liquide.
Composants
UltraNuclease de qualité GMP (250 U/μL)
Conditions de stockage
Le produit est expédié avec de la glace sèche et peut être stocké à -25℃~-15°C pendant deux ans.
Si le produit est ouvert et a été conservé à 4℃ pendant plus d'une semaine, nous recommandons de le filtrer afin d'éviter toute contamination microbienne.
Caractéristiques
| Hôte d'expression | Escherichia coli recombinante avec le gène UltraNuclease |
| Poids moléculaire | 26,5 kDa |
| Point électrique | 6.85 |
| Pureté | ≥99% (SDS-PAGE) |
| Tampon de stockage | Tris-HCl 20 mM, MgCl₂ 2 mM, NaCl 20 mM, glycérol 50 % |
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Définition de l'unité | La définition d'une unité d'activité (U) est la quantité d'enzyme utilisée pour modifier la valeur d'absorption de ΔA260 de 1,0 en 30 minutes dans un système de réaction de 2,625 mL à 37°℃ avec un pH de 8,0 (équivalent à la digestion complète de 37 μg d'ADN de sperme de saumon en oligonucléotides). |
Instructions
1. Échantillon Collection
Cellules adhérentes : retirer le milieu, laver les cellules avec du PBS et retirer le surnageant.
Cellules en suspension : recueillir les cellules par centrifugation, laver les cellules avec du PBS, centrifuger à 6 000 tr/min pendant 10 min, recueillir le culot.
Escherichia coli : recueillir les bactéries par centrifugation, laver une fois avec du PBS, centrifuger à 8 000 tr/min pendant 5 min et recueillir le culot.
2. Traitement des échantillons
Traiter les culots cellulaires recueillis avec un tampon de lyse dans un rapport masse (g) / volume (mL) de 1:(10-20), ou par des méthodes mécaniques ou chimiques sur glace ou à température ambiante (1 g de culot cellulaire contient environ
109 cellules).
3. Traitement enzymatique
Ajouter 1 à 5 mM de MgCl au système réactionnel et ajuster le pH à 8-9.
Ajouter UltraNuclease à raison de 250 unités pour digérer 1 g de culot cellulaire et incuber à 37 °C pendant plus de 30 minutes. Se référer au tableau « Temps de réaction recommandé » pour choisir la durée du traitement.
4. Surnageant Collection
Centrifuger à 12 000 tr/min pendant 30 minutes et recueillir le surnageant.
Remarque : Si la solution est acide ou alcaline, ou contient des concentrations élevées de sel, de détergents ou de dénaturants, veuillez augmenter la dose d'enzyme ou prolonger la durée du traitement en conséquence.
Conditions de réaction recommandéesnous
| Paramètre | Condition optimale | Conditionneur efficace |
| Concentration de Mg²⁺ | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Température | 37°℃ | 0-42℃ |
| Concentration de DTT | 0-100 mM | >0 mM |
| Concentration de mercaptoéthanol | 0-100 mM | >0 mM |
| Concentration de cations monovalents | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Concentration en ions phosphate | 0-10 mM | 0-100 mM |
Recommandé Réaction Temps (37℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Quantité d'UltraNuclease (Concentration finale) | Temps de réaction |
| 0,25 U/mL | >10 h |
| 2,5 U/mL | >4h |
| 25 U/mL | 30 min |
Remarques :
Veuillez porter les EPI nécessaires, tels que blouse de laboratoire et gants, pour assurer votre santé et votre sécurité !
