Uracile-ADN Glycosylase (UNG) HYA313
L'uracile-ADN glycosylase (UNG ou UDG) est dérivée de l'expression du clone recombinant de E. coli,Cette enzyme, d'un poids moléculaire de 25 kDa, catalyse la libération d'uracile libre à partir d'ADN simple brin et double brin contenant de l'uracile. Inactive sur l'ARN, elle permet de prévenir la contamination par les produits d'amplification PCR. Son mécanisme d'action repose sur le principe suivant : si du dUTP est utilisé à la place du dTTP lors de la réaction PCR, un produit d'amplification PCR contenant la base dU est formé. L'enzyme clive sélectivement la liaison glycosidique de l'uracile dans l'ADN simple brin et double brin, dégradant ainsi le produit d'amplification PCR.
Composants
| Composant | 100 U | 1000 U | 5000 U |
| 1 U/µL d'uracile-ADN glycosylase | 100 µL | 1 mL | 5 mL |
Stockage
Conserver entre -25°C et -15°C.
Définition de l'unité
1 unité est définie comme la quantité d'enzyme qui dégrade 1 µg d'ADN simple brin contenant du dU en 1 heure à 37°C.
Contrôle de qualité
1. Pureté de l'électrophorèse SDS-PAGE supérieure à 98 %.
2. Activité de dégradation, variation d'un lot à l'autre et stabilité.
3. Après traitement de 1 U d'UNG à 50 °C pendant 2 min, les matrices contenant de l'uranium avec moins de 103Les copies doivent être complètement dégradées et aucun produit d'amplification ne doit être produit.
4. Aucune activité nucléasique exogène.
Notes
1. L'enzyme UNG peut être utilisée avant la réaction d'amplification PCR pour éliminer les produits amplifiés de dUTP contaminant le système de réaction afin d'éviter les faux positifs causés par la contamination du produit.
2. La température optimale pour l'enzyme UNG à utiliser dans la réaction PCR anti-contamination est généralement de 50℃, la durée est de 2 min ; la condition d'inactivation est de 95℃ pendant 5 min.
3. Les cycles répétés de congélation et de décongélation doivent être évités, et il ne faut pas exposer le produit à un environnement présentant d'importantes fluctuations de température.
4. L'efficacité d'utilisation du dUTP et la sensibilité à l'enzyme UNG varient selon les gènes à amplifier. Par conséquent, si l'utilisation du système UNG entraîne une diminution de la sensibilité de détection, le système réactionnel doit être ajusté et optimisé. Pour toute assistance technique, veuillez contacter notre société.