Enzyme de coiffage du virus de la vaccine HYJ231
L'enzyme de coiffage du virus de la vaccine, issue d'une souche recombinante d'Escherichia coli porteuse du gène MR du virus, est composée de deux sous-unités, D1R et D12L, et possède trois activités enzymatiques : triphosphatase d'ARN, guanylyltransférase et guanine méthyltransférase. Cette enzyme catalyse efficacement la formation d'une coiffe, en ajoutant spécifiquement une coiffe de 7-méthylguanylate (m7Gppp, coiffe 0) à l'extrémité 5' de l'ARN. Cette coiffe (coiffe 0) joue un rôle crucial dans la stabilité, le transport et la traduction des ARNm eucaryotes. Le coiffage enzymatique de l'ARN est une méthode simple et efficace qui permet d'améliorer significativement la stabilité et la capacité de traduction de l'ARN pour la transcription in vitro, la transfection et la micro-injection.
Composants
| Composants | 2KDANS | 10KDANS | 100À | 1000KU |
| Enzyme de coiffage du virus de la vaccine (10 U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
| Tampon de plaquage 10× | 0,4 mL | 2×1mL | 2 × 10 mL | 2×100mL |
Stockage
À conserver entre -25 et -15 °C. Se conserve 2 ans (éviter les cycles de congélation-décongélation répétés).
tampon de stockage
20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 0,1 % Triton X-100, 50 % glycérol.
Définition de l'activité
Une unité (U) d'activité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer complètement 10 pmol de GTP dans un transcrit de 80 nt en 1 h à 37 °C.
Contrôle de qualité
1. Activité exonucléase : Lorsque 10 U de ce produit ont réagi avec 1 μg d'ADN digéré par λ-Hind III à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
2. Activité endonucléase : Lorsque 10 U de ce produit ont réagi avec 1 μg d'ADN λ à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
3. Activité de la nickase : Lorsque 10 U de ce produit ont réagi avec 1 μg de pBR322 à 37 °C pendant 16 heures, la bande électrophorétique de l'ADN est restée inchangée.
4. Activité RNase : Lorsque 10 U de ce produit ont réagi avec 1,6 μg d'ARN MS2 à 37 °C pendant 4 heures, la bande électrophorétique de l'ARN est restée inchangée.
5. ADN résiduel d'E. coli : L'acide nucléique résiduel dans 10 U de ce produit a été détecté par qPCR TaqMan spécifique de l'ADNr 16S d'E. coli, et le résidu du génome d'E. coli était ≤1. Copie ;
6. Endotoxine : Test LAL, Pharmacopée chinoise édition 2020 Partie IV Règles générales du test de limite de gel (1143), teneur en endotoxines bactériennes ≤ 10 UE/mg.