Kit ELISA Vero HCP (ELISA en une étape) HYI113
Ce kit repose sur un dosage immuno-enzymatique (ELISA) en phase solide, utilisant une technique de sandwich à double anticorps pour la détection de protéines de cellules hôtes (HCP) résiduelles issues de cellules Vero. Un anticorps polyclonal de mouton spécifique des HCP Vero a été utilisé pour capturer les HCP résiduelles dans l'échantillon. La couverture de l'anticorps est évaluée selon la méthode standard actuelle. L'étalon de calibration (ou l'échantillon à tester) et l'anticorps anti-HCP Vero marqué à la peroxydase de raifort (HRP) ont été ajoutés simultanément à la plaque de microtitration, préalablement recouverte de l'anticorps de capture purifié par affinité. Après incubation et lavage, le substrat TMB (3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine) a été ajouté à la réaction. La HRP a catalysé l'oxydation du TMB par H₂O₂.2LE2On obtient ainsi un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). L'ajout d'une solution d'arrêt stoppe la réaction enzymatique, ce qui donne un produit jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à 450 nm sont positivement corrélées à la concentration en protéines de la cellule hôte (HCP) dans la solution étalon et dans l'échantillon. La concentration en HCP dans l'échantillon peut être calculée à partir de la courbe dose-réponse.
Applications
Ce kit est adapté au dosage des protéines de cellules hôtes (PCH) dérivées de cellules Vero dans divers bioproduits, obtenus par lyse cellulaire par sonication. Ce kit est réservé à la recherche et ne doit pas être utilisé en clinique.
Figure 1. Schéma
Composants
| Réactif | Quantité | Notes |
| Vero HCP Étalon de calibration | 2 bouteilles | Poudre lyophilisée. Dissoudre dans 500 μL de solution de reconstitution et laisser reposer environ 5 minutes jusqu'à obtention d'une solution transparente. Se référer aux instructions figurant sur l'étiquette du tube. |
| Anti-Vero HCP Bandes de microtitration | 8 puits × 12 bandes | Bandelettes pré-enduites d'anticorps d'affinité anti-Vero HCP de mouton, conditionnées sous vide avec un dessiccant. Refermer et conserver immédiatement après utilisation. |
| Solution de reconstitution | 1 × 1,5 mL | Utilisé uniquement pour dissoudre l'étalon de calibration Vero HCP. |
| Diluant | 2 × 25 mL | Pour la dilution de l'étalon de calibration, Anti-Vero:HRP (100×) et des échantillons. |
| Concentré de tampon de lavage (10×) | 2 × 25 mL | Se cristallise facilement à basse température ; incuber à 37 °C au bain-marie avant utilisation. Diluer 10 fois. fois avec de l'eau ultra-pure fraîchement préparée pour obtenir 1×solution tampon de lavage. |
| Anti-Vero:HRP (100×) | 1×120 μL | Anticorps de mouton purifié par affinité et conjugué à la peroxydase de raifort (HRP) dans une matrice protéique avec conservateur. Diluer 100 fois dans le diluant avant utilisation. |
| Substrat TMB | 1×12 mL | Bien refermer et conserver à l'abri de la lumière. Laisser le récipient s'équilibrer à température ambiante pendant 20 minutes avant utilisation. |
| Solution d'arrêt | 1×6 mL | Acide chlorhydrique 1 M. Éviter tout contact direct avec les yeux, la peau et les vêtements. |
| Film de scellage | 3 pièces | Recouvrir les bandelettes avec ce matériau pendant l'incubation afin d'éviter toute contamination et l'évaporation du liquide. |
Remarque : La température ambiante fait référence à 25 °C.±3℃.
Conditions de stockage
Conserver le kit entre 2 et 8 °C. Utiliser avant la date de péremption indiquée sur l'emballage. Les composants ouverts doivent être conservés comme suit.
Tableau 2. Conditions de stockage recommandées pour les composants ouverts
| Composant | Stabilité |
| Bandelettes de microtitration Anti-Vero HCP | Conserver dans le sachet avec un dessiccant à une température de 2 à 8 °C pendant 30 jours maximum. |
| Cellules souches hématopoïétiques Vero reconstituées Étalon de calibration | Conserver à -20℃, congeler et décongeler au maximum 3 fois. |
Matériel nécessaire mais non fourni dans le kit
1. Tubes à centrifuger stériles pour dilution
2. Papier absorbant pour le séchage des assiettes
3. Embouts de pipette
4. Réservoirs de réactifs multicanaux (50 mL)
Équipements connexes
1. Lecteur de microplaques capable de mesurer l'absorbance à 450 nm, avec la longueur d'onde de correction réglée entre 620 nm et 650 nm.
2. Pipettes monocanal ou multicanaux
3. Thermoagitateur pour microplaques
4. Incubateur (facultatif)
5. Laveuse à vaisselle (en option)