ADN polymérase Warm Start Bst 2.0 (sans glycérol) HYB113
L'ADN polymérase Bst 2.0 est dérivée de Bacillus stearothermophilusL'ADN polymérase I possède une activité ADN polymérase 5'→3' et une forte activité de remplacement de chaîne, mais aucune activité exonucléase 5'→3'. L'ADN polymérase Bst 2.0 est parfaitement adaptée au déplacement de brin, à l'amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) et au séquençage rapide. La version Warm Start de l'ADN polymérase Bst 2.0, obtenue par une technologie de modification réversible, inhibe l'activité ADN polymérase à température ambiante. Le système réactionnel peut ainsi être préparé et mis en œuvre à température ambiante afin de prévenir l'amplification non spécifique et d'améliorer l'efficacité de la réaction. Cette version est également lyophilisable. De plus, son activité est libérée à haute température, ce qui élimine le besoin d'une étape d'activation supplémentaire.
Composants
| Composants | 1600U | 8000U | 80000U |
| ADN polymérase Warm Start Bst 2.0 (sans glycérol) (8 U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 mL |
| Tampon 10×HH Bst 2.0 | 1,5 mL | 2 × 1,5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 mL | 2 × 1,5 mL | 2 × 10 mL |
Stockage
Ce produit doit être conservé entre -25 et -15°C.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui incorpore 25 nmol de dNTP dans une matière insoluble dans l'acide en 30 minutes à 65 °C.
Contrôle de qualité
1. Dosage de la pureté des protéines (SDS-PAGE) :La pureté de l'ADN polymérase Bst 2.0 est ≥ 99 % déterminée par analyse SDS-PAGE.
2. Activité endonucléase :L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8U de Warm Start Bst 2.0 DNA polymérase avec 1 μg λDNA pendant 16 heures à 37℃ ne donne lieu à aucune dégradation détectable, comme déterminé.
3. Activité exonucléase :L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U de polymérase Warm Start Bst DNA 2.0 avec 1 μg d'ADN digéré λ -Hind Ⅲ pendant 16 heures à 37℃ ne donne lieu à aucune dégradation détectable, comme déterminé.
4. Activité Nickase :L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U de Warm Start Bst 2.0 DNA polymerase avec 1 μg d'ADN pBR322 pendant 16 heures à 37°C ne donne lieu à aucune dégradation détectable, comme déterminé.
5. Activité RNase :L'incubation d'une réaction de 50 μL contenant un minimum de 8 U de polymérase d'ADN Warm Start Bst 2.0 avec 1,6 μg d'ARN MS2 pendant 16 heures à 37 °C ne donne lieu à aucune dégradation détectable, comme déterminé.
6. E. coli ADN : 120 U de polymérase Warm Start Bst DNA 2.0 sont analysées pour détecter la présence de E. coli ADN génomique par qPCR TaqMan avec des amorces spécifiques pour E. coliLocus de l'ARNr 16S. E. coliLa contamination de l'ADN génomique est ≤ 1 copie.
Instructions
1. Système réactionnel
| Composants | Volume |
| Tampon 10×HH Bst 2.0 | 2,5 µL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 µL |
| dNTP (10 mM chacun) | 3,5 µL |
| SYTOMC16 Verts (25×)* | 1 µL |
| Mélange d'apprêt** | 6 µL |
| ADN polymérase Warm Start Bst 2.0 (sans glycérol) (8 U/μL) | 1 µL |
| Modèle | × μL |
| ddH2LE | Jusqu'à 25 μL |
*SYTOTM 16 Vert (25 ×) : Selon les besoins expérimentaux, d'autres colorants peuvent être utilisés comme substituts ;
**Mélange d'amorces : obtenu en mélangeant des volumes égaux de 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB.
2. Conditions de réaction
1 × Tampon HH Bst 2.0, la température d'incubation est comprise entre 60 °C et 65 °C.
3. Inactivation par la chaleur
80°C, 20 minutes.
Application
1. Amplification isotherme LAMP ;
2. Réaction de déplacement simple d'un brin d'ADN ;
3. Séquençage de gènes à haute teneur en GC ;
4. Séquençage d'ADN au niveau du nanogramme.