2 × Ro-mheasgachadh PCR (le dath) HYA442
Tha 2× PCR Master Mix anns a bheil Taq DNA Polymerase, dNTPs, agus co-phàirtean eile a tha riatanach airson PCR. Tha am Master Mix seasmhach airson 3 mìosan aig 4℃ leis na cobhsairean gnàthaichte againn. Tha am fuasgladh ro-mheasgaichte air a bharrrachadh airson PCR àbhaisteach agus deiseil airson a chleachdadh le bhith a’ cur teamplaid DNA agus prìmearan ris. Faodar na toraidhean PCR a luchdachadh gu dìreach airson electrophoresis le dath gorm bromophenol ro-luchdaichte. Tha protrusion 3'-dA anns na toraidhean leasaichte agus faodar an clònadh gu furasta a-steach do vectar T. Bidh am 2× PCR Master Mix a’ sìmpleachadh modh-obrach PCR agus a’ lughdachadh truailleadh.
Co-phàirtean
| Co-phàirtean | Meud-1 | Meud-2 | Meud-3 |
| 2 × Ro-mheasgachadh PCR (le dath) | 5ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Stòradh
Stòraich aig -20°C airson 2 bhliadhna.
Stiùiridhean
1. Siostam Ath-bhualadh
| Co-phàirtean | Meud |
| 2 × Ro-mheasgachadh PCR (le dath) | 25 uL |
| Prìomhair Air Adhart (10 μM) | 2 µL |
| Prìomhair Cùil (10 μM) | 2 µL |
| Teamplaid DNA* | Caochladair |
| ddH2AN | Suas ri 50 µL |
* Cleachdadh teamplaid: 50-200 ng genomic DNA; 0.1-10 ng DNA plasmid
2. Prògram Ath-bhualadh
| Ceum | Teòthachd | Ùine | Cearcallan |
| Dì-nàdarrachadh Tùsail | 94 ℃ | 5 mionaidean | 1 |
| Dì-nàdarrachadh | 94 ℃ | 30 diogan | 35 |
| Annealing | 50-60 ℃ | 30 diogan | |
| Leudachadh | 72 ℃ | 30-60 diog/kb | |
| Leudachadh Deireannach | 72 ℃ | 10 mionaidean | 1 |
| Cùm | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ dùmhlachd: Tha 3 mM de MgCl anns an toradh seo2, freagarrach airson a’ mhòr-chuid de ath-bheachdan PCR.
2. Teòthachd an teasachaidh: Thoir sùil air luach teòiridheach Tm nam prìomhairean. Faodar an teòthachd teasachaidh a shuidheachadh gu 2-5 ℃ nas ìsle na luach teòiridheach a’ phrìomhaire.
3. Ùine leudachaidh: Airson comharrachadh moileciuil, thathar a’ moladh 30 diog/kb. Airson clònadh gine, thathar a’ moladh 60 diog/kb.
Notaichean
1. Chan eil toraidhean PCR le 2× PCR Master Mix freagarrach airson electrophoresis gel polyacrylamide.
2. Airson ur sàbhailteachd agus ur slàinte, cuiribh oirbh còtaichean obair-lann agus miotagan cuidhteasach nuair a bhios sibh ag obair.
3. Chan eil e air a chleachdadh ach airson rannsachadh!