2× premesturas para PCR (con colorante) HYA442
A mestura mestra para PCR 2× contén ADN polimerase Taq, dNTP e outros compoñentes necesarios para a PCR. A mestura mestra é estable durante 3 meses a 4 ℃ cos nosos estabilizadores personalizados. A solución de premestura está optimizada para a PCR convencional e lista para usar engadindo o molde de ADN e os cebadores. Os produtos de PCR pódense cargar directamente para electroforese cun colorante azul de bromofenol precargado. Os produtos amplificados conteñen unha protrusión de 3'-dA e pódense clonar facilmente no vector T. A mestura mestra para PCR 2× simplifica o procedemento de PCR e reduce a contaminación.
Compoñentes
| Compoñentes | Tamaño-1 | Tamaño-2 | Tamaño-3 |
| 2× premesturas para PCR (con colorante) | 5 ml | 1 mL × 15 | 1 mL × 50 |
Almacenamento
Gardar a -20 °C durante 2 anos.
Instrucións
1. Sistema de reacción
| Compoñentes | Volume |
| 2× premesturas para PCR (con colorante) | 25 µL |
| Cebador directo (10 μM) | 2 µL |
| Cebador inverso (10 μM) | 2 µL |
| Modelo de ADN* | Variable |
| ddH2O/A | Ata 50 µL |
*Uso do modelo: 50-200 ng de ADN xenómico; 0,1-10 ng de ADN plasmídico
2. Programa de reacción
| Paso | Temperatura | Tempo | Ciclos |
| Desnaturalización inicial | 94 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 94 ℃ | 30 segundos | 35 |
| Recocido | 50-60 ℃ | 30 segundos | |
| Extensión | 72 ℃ | 30-60 segundos/kb | |
| Extensión final | 72 ℃ | 10 minutos | 1 |
| Agardar | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ concentración: Este produto contén 3 mM de MgCl2, axeitado para a maioría das reaccións de PCR.
2. Temperatura de recocido: Consulte o valor teórico de Tm dos cebadores. A temperatura de recocido pódese axustar entre 2 e 5 ℃ por debaixo do valor teórico do cebador.
3. Tempo de extensión: Para a identificación molecular, recoméndase 30 segundos/kb. Para a clonación de xenes, recoméndase 60 segundos/kb.
Notas
1. Os produtos de PCR con 2× PCR Master Mix non son axeitados para a electroforese en xel de poliacrilamida.
2. Pola súa seguridade e saúde, use batas de laboratorio e luvas desbotables para a operación.
3. Úsase SÓ para uso en investigación!