2× PCR előkeverék (festékkel) HYA442
A 2× PCR Master Mix Taq DNS polimerázt, dNTP-ket és egyéb, PCR-hez szükséges komponenseket tartalmaz. A Master Mix 3 hónapig stabil 4℃-on, egyedi stabilizátorainkkal. Az előkeverék oldat a hagyományos PCR-hez van optimalizálva, és DNS-templát és primerek hozzáadásával azonnal felhasználható. A PCR-termékek közvetlenül tölthetők elektroforézishez előre betöltött brómfenolkék festékkel. Az amplifikált termékek 3'-dA nyúlványt tartalmaznak, és könnyen klónozhatók T-vektorba. A 2× PCR Master Mix leegyszerűsíti a PCR eljárást és csökkenti a szennyeződést.
Alkatrészek
| Alkatrészek | 1-es méret | 2-es méret | 3-as méret |
| 2× PCR előkeverék (festékkel) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Tárolás
-20°C-on 2 évig tárolandó.
Utasítás
1. Reakciórendszer
| Alkatrészek | Kötet |
| 2× PCR előkeverék (festékkel) | 25 µl |
| Előrehaladó primer (10 μM) | 2 µL |
| Fordított primer (10 μM) | 2 µL |
| DNS-sablon* | Változó |
| ddH2A | Akár 50 µL |
*Sablonhasználat: 50-200 ng genomiális DNS; 0,1-10 ng plazmid DNS
2. Reakcióprogram
| Lépés | Hőmérséklet | Idő | Ciklusok |
| Kezdeti denaturáció | 94 ℃ | 5 perc | 1 |
| Denaturáció | 94 ℃ | 30 másodperc | 35 |
| Lágyítás | 50-60 ℃ | 30 másodperc | |
| Kiterjesztés | 72 ℃ | 30-60 mp/kb | |
| Végső hosszabbítás | 72 ℃ | 10 perc | 1 |
| Tart | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ koncentráció: Ez a termék 3 mM MgCl₂-t tartalmaz2, a legtöbb PCR-reakcióhoz alkalmas.
2. Lágyítási hőmérséklet: Kérjük, tekintse meg a primerek elméleti Tm értékét. A lágyítási hőmérséklet 2-5 ℃-kal alacsonyabbra állítható be, mint a primer elméleti értéke.
3. Hosszabbítási idő: Molekuláris azonosításhoz 30 mp/kb ajánlott. Génklónozáshoz 60 mp/kb ajánlott.
Megjegyzések
1. A 2× PCR Master Mix-et tartalmazó PCR-termékek nem alkalmasak poliakrilamid gélelektroforézisre.
2. Biztonsága és egészsége érdekében kérjük, viseljen laboratóriumi köpenyt és eldobható kesztyűt a kezelés során.
3. CSAK kutatási célra használható!