2× פרמיקס PCR (עם צבע) HYA442
תערובת אב של 2× PCR מכילה Taq DNA Polymerase, dNTPs ורכיבים נוספים הנדרשים ל-PCR. תערובת האב יציבה למשך 3 חודשים בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בעזרת המייצבים המותאמים אישית שלנו. תמיסת התערובת המקדימה מותאמת ל-PCR קונבנציונלי ומוכנה לשימוש על ידי הוספת תבנית DNA ופריימרים. ניתן לטעון את תוצרי ה-PCR ישירות לאלקטרופורזה עם צבע כחול ברומופנול טעון מראש. התוצרים המוגברים מכילים בליטה 3'-dA וניתן לשכפל אותם בקלות לתוך וקטור T. תערובת האב של 2× PCR מפשטת את הליך ה-PCR ומפחיתה זיהום.
רכיבים
| רכיבים | מידה-1 | מידה-2 | מידה-3 |
| 2× פרמיקס PCR (עם צבע) | 5 מ"ל | 1 מ"ל × 15 | 1 מ"ל × 50 |
אִחסוּן
יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס למשך שנתיים.
הוראות
1. מערכת תגובה
| רכיבים | כֶּרֶך |
| 2× פרמיקס PCR (עם צבע) | 25 מיקרוליטר |
| פריימר קדימה (10 מיקרומטר) | 2 מיקרוליטר |
| פריימר הפוך (10 מיקרומטר) | 2 מיקרוליטר |
| תבנית דנ"א* | מִשְׁתַנֶה |
| ddH2ה- | עד 50 מיקרוליטר |
*שימוש בתבנית: 50-200 ng DNA גנומי; 0.1-10 ng DNA פלסמיד
2. תוכנית תגובה
| שָׁלָב | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים |
| דנטורציה ראשונית | 94 מעלות צלזיוס | 5 דקות | 1 |
| דנטורציה | 94 מעלות צלזיוס | 30 שניות | 35 |
| רִכּוּך | 50-60 מעלות צלזיוס | 30 שניות | |
| הַרחָבָה | 72 מעלות צלזיוס | 30-60 שניות/קילו-בייט | |
| הארכה סופית | 72 מעלות צלזיוס | 10 דקות | 1 |
| לְהַחזִיק | 4 מעלות צלזיוס | - | 1 |
1. מגנזיום2+ ריכוז: מוצר זה מכיל 3 mM של MgCl2, מתאים לרוב תגובות ה-PCR.
2. טמפרטורת חישול: אנא עיין בערך ה-Tm התאורטי של הפריימרים. ניתן להגדיר את טמפרטורת החישול ל-2-5 מעלות צלזיוס נמוכה יותר מהערך התאורטי של הפריימר.
3. זמן הארכה: לזיהוי מולקולרי, מומלץ 30 שניות/קילו-בייט. לשיבוט גנים, מומלץ 60 שניות/קילו-בייט.
הערות
1. מוצרי PCR עם 2× PCR Master Mix אינם מתאימים לאלקטרופורזה של פוליאקרילאמיד בג'ל.
2. למען בטיחותכם ובריאותכם, אנא לבשו חלוקי מעבדה וכפפות חד פעמיות במהלך הניתוח.
3. הוא משמש למטרות מחקר בלבד!