ערכת DNA/RNA ויראלי אוניברסלית מגנטית HYD521
ערכת DNA/RNA נגיפית אוניברסלית מגנטית מתאימה להפקת חומצות גרעין נגיפיות מדם מלא או מנוזלי גוף נטולי תאים (כגון סרום, פלזמה, נוזל מוחי שדרתי, דגימות אף/לוע, נוזל שטיפה אלוואולרית וכו'). שיטה זו משתמשת בטכנולוגיית טיהור של חרוזים מגנטיים, ואין צורך בחילוץ פנול כלורופורם רעיל במהלך תהליך החילוץ. היא בטוחה, לא רעילה ומהירה. ניתן להשתמש במוצר המתקבל ישירות ב-PCR, qPCR, ריצוף דור שני וניסויים אחרים. כאשר משתמשים בו עם מכשירי חילוץ אוטומטיים של חרוזים מגנטיים, ניתן להשיג חילוץ בתפוקה גבוהה של חומצות גרעין.
מידע על המוצר
| רכיבים | 48T |
| ליזיס ותמיסת קשירה | 33 מ"ל |
| תליית חרוזים מגנטית | 1.1 מ"ל |
| בופר כביסה A | 40 מ"ל |
| בופר כביסה B | 80 מ"ל |
| תמיסת אלוציה | 10 מ"ל |
| פרוטאינאז K | 1.1 מ"ל |
תנאי אחסון
יש לאחסן את פרוטאינאז K בטמפרטורה של 2~8 מעלות צלזיוס ואת שאר המרכיבים יש לאחסן בטמפרטורת החדר. חיי המדף הם 18 חודשים.
תיאור לדוגמה
1. סוגי דגימות רלוונטיים: דם מלא, סרום, פלזמה, נוזל מוחי שדרתי, דגימות אף/לוע, נוזל שטיפת אלוואולריות ודגימות אחרות.
2. אחסון והובלת דגימות: ניתן להשתמש בדגימות לבדיקה באופן מיידי או לאחסן אותן בטמפרטורה של -70 מעלות צלזיוס או פחות. תקופת האחסון היא 6 חודשים. יש להימנע מהקפאה והפשרה חוזרות ונשנות. הדגימות מועברות בשרשרת קרה.
3. דרישות הקפאה-הפשרה: הקפאה והפשרה מהירות, הימנעו מהקפאה והפשרה חוזרות ונשנות.
מִבצָע
לפני הניסוי, בדקו האם בתמיסה יש משקעים והאם ניתן להשעות מחדש את החרוזים המגנטיים.
1. העבירו 200~300 מיקרוליטר של דגימה למבחנת צנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל, הוסיפו 600 מיקרוליטר של תמיסת ליזיס וקישור, 20 מיקרוליטר של פרוטאינאז K, ו-20 מיקרוליטר של תרחיף חרוזים מגנטיים ברצף, וערבבו במהירות גבוהה במשך 30 שניות. דגירה ב-50 מעלות צלזיוס במשך 5~7 דקות. אם לתרמוסטט אין פונקציית תנודה, ערבבו 3 פעמים במהלך תקופת הדגירה, כל פעם במשך 15 שניות.
2. העבירו למעמד מגנטי של 1.5 מ"ל להפרדה מגנטית עד שהתמיסה צלולה ושקופה, והשליכו את התמיסה.
3. הוסיפו 700 מיקרוליטר של בופר שטיפה A, ערבבו במערבולת במשך 10 שניות כדי לפרק את החרוזים המגנטיים, ולאחר מכן העבירו למעמד מגנטי להפרדה מגנטית עד שהתמיסה צלולה, והשליכו את התמיסה.
4. הוסיפו 700 μL של בופר שטיפה B, ערבבו במערבל במשך 10 שניות כדי לפרק את החרוזים המגנטיים, העבירו למעמד מגנטי להפרדה מגנטית עד שהתמיסה צלולה, והשליכו את התמיסה.
5. הוסיפו שוב 700 μL של בופר שטיפה B, ערבבו במערבל במשך 10 שניות כדי לפרק את החרוזים המגנטיים, העבירו למעמד מגנטי להפרדה מגנטית עד שהתמיסה צלולה, והשליכו את התמיסה.
6. בצנטריפוגה קצרה לאיסוף טיפות על דופן המבחנה, העבר למעמד מגנטי לצורך הבהרה וספח את הנוזל הנותר. ייבוש באוויר למשך 3-5 דקות.
הערה: שאריות אתנול יעכבו תגובות אנזימים עוקבות, לכן יש לוודא שהאתנול מתאדה לחלוטין בעת הייבוש. אין לייבש זמן רב מדי כדי למנוע פגיעה באפקט האלוציה העוקב אחר כך.
7. הוסיפו 40~100 מיקרוליטר של תמיסת אלוציה, ערבבו במערבולת במהירות גבוהה במשך 2~3 דקות כדי לפרק את החרוזים המגנטיים. דגרו ב-60 מעלות צלזיוס במשך 5 דקות, ולאחר מכן ערבבו במערבולת במהירות גבוהה במשך 60 שניות.
8. בצנטריפוגה מיידית לאיסוף הנוזל ממכסה המבחנה ולהעברה למדף המגנטי עד שהחרוזים המגנטיים נספגים לחלוטין. לאחר מכן, העבירו בזהירות את הנוזל למבחנה חדשה כדי לקבל את תמיסת חומצת הגרעין.
9. ניתן לאחסן את תמיסת חומצת הגרעין בטמפרטורה של -20°C לאחסון לטווח קצר ובטמפרטורה של -80°C לאחסון לטווח ארוך.
הערות
1. הבופרים השונים בערכה זו מכילים מלחי גואנידין. למען בטיחותכם ובריאותכם, אנא לבשו חלוק מעבדה וכפפות חד פעמיות. וטפלו בהתאם לאמצעי הזהירות הסטנדרטיים. אין לאפשר לבופר לבוא במגע עם העור, העיניים והריריות. אם זה קורה, יש לשטוף מיד עם הרבה מים ולפנות לטיפול רפואי.
2. אם התמיסה משקעת, יש להשרות אותה במים בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס עד להמסה מלאה של המשקע לפני השימוש.
3. אם תרחיף החרוזים המגנטיים קפוא, אין להשתמש בו.
4. הבופרים השונים בערכה זו מכילים מלחי גואנידין. אין להשתמש בחומרי חיטוי מחמצנים כגון נתרן היפוכלוריט לטיפול בהם, אחרת ייפלטו גזים רעילים ויש לטפל בהם כפסולת רפואית.
5. ייתכן שיישארו חרוזים מגנטיים במהלך האלוציה. נסו להימנע משאיפת חרוזים מגנטיים בעת שאיבת דגימות.