2× PCR Premix （karo Pewarna） HYA442
2× PCR Master Mix ngandhut Taq DNA Polymerase, dNTPs, lan komponen liyane sing dibutuhake PCR. Master Mix stabil sajrone 3 sasi ing suhu 4℃ nganggo stabilisator khusus. Larutan pra-campuran dioptimalake kanggo PCR konvensional lan siap digunakake kanthi nambahake cithakan DNA lan primer. Produk PCR bisa dimuat langsung kanggo elektroforesis nganggo pewarna biru bromofenol sing wis dimuat. Produk sing diamplifikasi ngandhut tonjolan 3'-dA lan bisa diklon kanthi gampang menyang vektor T. 2× PCR Master Mix nyederhanakake prosedur PCR lan nyuda kontaminasi.
Komponen
| Komponen | Ukuran-1 | Ukuran-2 | Ukuran-3 |
| 2× PCR Premix (karo Pewarna) | 5mL | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Panyimpenan
Simpen ing suhu -20°C sajrone 2 taun.
Pandhuan
1. Sistem Reaksi
| Komponen | Volume |
| 2× PCR Premix (karo Pewarna) | 25 uL |
| Primer Maju (10 μM) | 2 µL |
| Primer Balik (10 μM) | 2 µL |
| Cithakan DNA* | Variabel |
| ddH2ING | Nganti 50 µL |
* Panggunaan cithakan: 50-200 ng DNA genom; 0,1-10 ng plasmid DNA
2. Program Reaksi
| Langkah | Suhu | Wektu | Siklus |
| Denaturasi Awal | 94 ℃ | 5 menit | 1 |
| Denaturasi | 94 ℃ | 30 detik | 35 |
| Anil | 50-60 ℃ | 30 detik | |
| Ekstensi | 72 ℃ | 30-60 detik/kb | |
| Perpanjangan Akhir | 72 ℃ | 10 menit | 1 |
| Tahan | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ konsentrasi: Produk iki ngandhut 3 mM MgCl2, cocok kanggo umume reaksi PCR.
2. Suhu anil: Deloken nilai Tm teoretis primer. Suhu anil bisa disetel dadi 2-5℃ luwih murah tinimbang nilai teoretis primer.
3. Wektu tambahan: Kanggo identifikasi molekuler, 30 detik/kb disaranake. Kanggo kloning gen, 60 detik/kb disaranake.
Cathetan
1. Produk PCR nganggo 2× PCR Master Mix ora cocok kanggo elektroforesis gel poliakrilamida.
2. Kanggo keamanan lan kesehatan panjenengan, mangga ngagem jas lab lan sarung tangan sekali pakai nalika operasi.
3. Iki mung digunakake kanggo riset!