2× ПТР премиксі (бояғышпен) HYA442
2× ПТР мастер-миксі құрамында Taq ДНҚ полимеразасы, dNTP және басқа да ПТР үшін қажетті компоненттер бар. Master Mix біздің арнайы тұрақтандырғыштарымызбен 4℃ температурада 3 ай бойы тұрақты. Алдын ала араластыру ерітіндісі дәстүрлі ПТР үшін оңтайландырылған және ДНҚ шаблондары мен праймерлерді қосу арқылы пайдалануға дайын. ПТР өнімдерін алдын ала жүктелген бромфенол көк бояғышымен электрофорез үшін тікелей жүктеуге болады. Күшейтілген өнімдерде 3 '-dA шығыңқысы бар және оларды Т векторына оңай клондауға болады. 2× ПТР мастер-миксі ПТР процедурасын жеңілдетеді және ластануды азайтады.
Компоненттер
| Компоненттер | 1-өлшем | Өлшемі-2 | 3-өлшем |
| 2× ПТР премиксі (бояғышпен) | 5 мл | 1 мл×15 | 1 мл×50 |
Сақтау орны
-20°C температурада 2 жыл сақтаңыз.
Нұсқаулар
1. Реакция жүйесі
| Компоненттер | Дыбыс деңгейі |
| 2× ПТР премиксі (бояғышпен) | 25 мкл |
| Алға қарай бағытталған праймер (10 мкМ) | 2 мкл |
| Кері праймер (10 мкМ) | 2 мкл |
| ДНҚ үлгісі* | Айнымалы |
| ddH2THE | 50 мкл дейін |
*Үлгі қолдану: 50-200 нг геномдық ДНҚ; 0,1-10 нг плазмидті ДНҚ
2. Реакция бағдарламасы
| Қадам | Температура | Уақыт | Велосипедтер |
| Бастапқы денатурация | 94 ℃ | 5 мин | 1 |
| Денатурация | 94 ℃ | 30 с | 35 |
| Күйдіру | 50-60 ℃ | 30 с | |
| Кеңейту | 72 ℃ | 30-60 сек/кб | |
| Соңғы кеңейтім | 72 ℃ | 10 мин | 1 |
| Ұстап тұру | 4 ℃ | - | 1 |
1. Мг2+ концентрациясы: Бұл өнімнің құрамында 3 мМ MgCl2 бар2, ПТР реакцияларының көпшілігіне жарамды.
2. Күйдіру температурасы: Праймерлердің теориялық Tm мәнін қараңыз. Күйдіру температурасын праймердің теориялық мәнінен 2-5℃ төмен орнатуға болады.
3. Ұзарту уақыты: Молекулалық идентификация үшін 30 сек/кб ұсынылады. Гендерді клондау үшін 60 сек/кб ұсынылады.
Ескертпелер
1. 2× PCR Master Mix бар ПТР өнімдері полиакриламидті гель электрофорезіне жарамайды.
2. Қауіпсіздігіңіз бен денсаулығыңыз үшін жұмыс кезінде зертханалық халат пен бір рет қолданылатын қолғап киіңіз.
3. Ол ТЕК зерттеу мақсатында қолданылады!