2× PCR Premix (bi Boyaxê re) HYA442
2× PCR Master Mix Taq DNA Polymerase, dNTP, û pêkhateyên din ên pêwîst ji bo PCR dihewîne. Master Mix bi stabîlîzatorên me yên xwerû 3 mehan di 4℃ de sabît e. Çareseriya pêş-tevlihevkirinê ji bo PCR-ya kevneşopî hatîye çêtirkirin û bi zêdekirina şablon û primerên DNA-yê amade ye ku were bikar anîn. Berhemên PCR-ê dikarin rasterast ji bo elektroforezê bi boyaxa şîn a bromophenol-a pêş-barkirî werin barkirin. Berhemên zêdekirî protrusiyona 3 '-dA dihewînin û dikarin bi hêsanî di vektora T de werin klon kirin. 2× PCR Master Mix prosedurên PCR-ê hêsan dike û qirêjbûnê kêm dike.
Pêkhateyên
| Pêkhateyên | Mezinahiya-1 | Mezinahiya-2 | Mezinahiya-3 |
| 2× PCR Premix (bi Boyaxê re) | 5mL | 1 mL×15 | 1 mL×50 |
Embarkirinî
Ji bo 2 salan li -20°C hilînin.
Rênimayên
1. Sîstema Reaksiyonê
| Pêkhateyên | Bend |
| 2× PCR Premix (bi Boyaxê re) | 25 uL |
| Amadekariya Pêş (10 μM) | 2 µL |
| Amadekariya Berevajî (10 μM) | 2 µL |
| Şablona DNAyê* | Têgûherr |
| ddH2EW | Heta 50 µL |
*Bikaranîna şablonê: 50-200 ng DNA genomîk; 0,1-10 ng DNAya plazmîdê
2. Bernameya Reaksiyonê
| Gav | Germî | Dem | Bisiklêt |
| Denaturasyona Destpêkê | 94 ℃ | 5 deqe | 1 |
| Denaturasyon | 94 ℃ | 30 çirke | 35 |
| Tefandin | 50-60 ℃ | 30 çirke | |
| Dirêjkirinî | 72 ℃ | 30-60 saniye/kb | |
| Dirêjkirina Dawî | 72 ℃ | 10 deqe | 1 |
| Rawestan | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ konsantrasyon: Ev berhem 3 mM MgCl dihewîne2, ji bo piraniya reaksiyonên PCR guncaw e.
2. Germahiya germkirinê: Ji kerema xwe li nirxa teorîk a Tm ya primeran binêrin. Germahiya germkirinê dikare 2-5℃ ji nirxa teorîk a primerê kêmtir were saz kirin.
3. Dema dirêjkirinê: Ji bo nasnameya molekulî, 30 saniye/kb tê pêşniyarkirin. Ji bo klona genê, 60 saniye/kb tê pêşniyarkirin.
Têbînî
1. Berhemên PCR-ê yên bi 2× PCR Master Mix ji bo elektroforeza jela polyacrylamide ne guncaw in.
٢. Ji bo ewlehî û tenduristiya xwe, ji kerema xwe di dema xebatê de cilên laboratîfê û lepikên yekcar bikarhatî li xwe bikin.
3. Ew TENÊ ji bo armancên lêkolînê tê bikar anîn!