2 × ПЦР премикси (боёк менен) HYA442
2× ПЦР мастер-миксинин курамында Taq ДНК полимеразасы, dNTP жана башка ПЦР талап кылган компоненттер бар. Master Mix биздин ылайыкташтырылган стабилизаторлорубуз менен 4℃ температурада 3 ай бою туруктуу болот. Алдын ала аралаштырылган эритме кадимки ПЦР үчүн оптималдаштырылган жана ДНК шаблонун жана праймерлерди кошуу менен колдонууга даяр. ПЦР продуктуларын алдын ала жүктөлгөн бромфенол көк боёгу менен электрофорез үчүн түздөн-түз жүктөөгө болот. Күчөтүлгөн продуктуларда 3'-dA чыгып турган бөлүгү бар жана аларды Т векторуна оңой клондоштурууга болот. 2× ПЦР мастер-микси ПЦР процедурасын жөнөкөйлөтөт жана булганууну азайтат.
Компоненттер
| Компоненттер | 1-өлчөм | Өлчөмү-2 | Өлчөмү-3 |
| 2× ПЦР премикси (боёк менен) | 5 мл | 1 мл×15 | 1 мл×50 |
Сактоо
-20°C температурада 2 жыл сактаңыз.
Нускамалар
1. Реакция системасы
| Компоненттер | Үн көлөмү |
| 2× ПЦР премикси (боёк менен) | 25 мкл |
| Алдыга багытталган праймер (10 мкМ) | 2 мкл |
| Тескери праймер (10 мкМ) | 2 мкл |
| ДНК шаблону* | Өзгөрмөлүү |
| ddH2ТӨ | 50 мкл чейин |
*Шаблонду колдонуу: 50-200 нг геномдук ДНК; 0,1-10 нг плазмиддик ДНК
2. Реакция программасы
| Кадам | Температура | Убакыт | Велосипеддер |
| Баштапкы денатурация | 94 ℃ | 5 мүн | 1 |
| Денатурация | 94 ℃ | 30 секунд | 35 |
| Күйгүзүү | 50-60 ℃ | 30 секунд | |
| Кеңейтүү | 72 ℃ | 30-60 сек/кб | |
| Акыркы узартуу | 72 ℃ | 10 мүнөт | 1 |
| Кармоо | 4 ℃ | - | 1 |
1. Мг2+ концентрациясы: Бул продукт 3 мМ MgCl2 камтыйт2, көпчүлүк ПЦР реакцияларына ылайыктуу.
2. Күйгүзүү температурасы: Сураныч, праймерлердин теориялык Tm маанисин караңыз. Күйгүзүү температурасы праймердин теориялык маанисинен 2-5℃ төмөн коюлушу мүмкүн.
3. Узартуу убактысы: Молекулярдык идентификациялоо үчүн 30 сек/кб сунушталат. Гендерди клондоо үчүн 60 сек/кб сунушталат.
Эскертүүлөр
1. 2× PCR Master Mix кошулган ПЦР продуктулары полиакриламид гелинин электрофорезине ылайыктуу эмес.
2. Коопсуздугуңуз жана ден соолугуңуз үчүн, операция учурунда лабораториялык халаттарды жана бир жолку кол каптарды кийиңиз.
3. Ал изилдөө максатында гана колдонулат!