2× PCR-Premix (mat Faarfstoff) HYA442
Den 2× PCR Master Mix enthält Taq DNA Polymerase, dNTPs an aner PCR-néideg Komponenten. De Master Mix ass 3 Méint bei 4℃ mat eise personaliséierte Stabilisatoren stabil. D'Pre-Mix-Léisung ass fir konventionell PCR optimiséiert a prett fir ze benotzen andeems DNA-Schabloun a Primer bäigefüügt ginn. D'PCR-Produkter kënnen direkt fir d'Elektrophorese mat virgeluedenem Bromphenolblo-Faarfstoff gelueden ginn. Déi amplifizéiert Produkter enthalen 3'-dA-Protrusioun a kënnen einfach an den T-Vektor geklont ginn. Den 2× PCR Master Mix vereinfacht d'PCR-Prozedur a reduzéiert d'Kontaminatioun.
Komponenten
| Komponenten | Gréisst-1 | Gréisst-2 | Gréisst-3 |
| 2× PCR-Premix (mat Faarfstoff) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Späicherung
2 Joer bei -20°C lageren.
Instruktiounen
1. Reaktiounssystem
| Komponenten | Volumen |
| 2× PCR-Premix (mat Faarfstoff) | 25 µL |
| Virwärtsprimer (10 μM) | 2 µL |
| Réckwärtsprimer (10 μM) | 2 µL |
| DNA-Schabloun* | Variabel |
| ddH2DEN | Bis zu 50 µL |
* Schabloun Benotzung: 50-200 ng genomesch DNA; 0,1-10 ng Plasmid DNA
2. Reaktiounsprogramm
| Schrëtt | Temperatur | Zäit | Zyklen |
| Initial Denaturatioun | 94 ℃ | 5 Minutten | 1 |
| Denaturatioun | 94 ℃ | 30 Sekonnen | 35 Joer |
| Glühen | 50-60 ℃ | 30 Sekonnen | |
| Erweiderung | 72 ℃ | 30-60 Sekonnen/kb | |
| Schlussendlech Verlängerung | 72 ℃ | 10 Minutten | 1 |
| Halt | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ Konzentratioun: Dëst Produkt enthält 3 mM MgCl2, gëeegent fir déi meescht PCR-Reaktiounen.
2. Glühtemperatur: Kuckt Iech w.e.g. den theoreteschen Tm-Wäert vun de Primer un. D'Glühtemperatur kann op 2-5 ℃ méi niddreg wéi den theoretesche Wäert vum Primer agestallt ginn.
3. Verlängerungszäit: Fir molekular Identifikatioun sinn 30 sek/kb recommandéiert. Fir Genklonéierung sinn 60 sek/kb recommandéiert.
Notizen
1. PCR-Produkter mat 2× PCR Master Mix sinn net gëeegent fir Polyacrylamid-Gelelektrophorese.
2. Fir Är Sécherheet a Gesondheet, drot w.e.g. Labormäntel an Ewechwerfhandschuesch beim Gebrauch.
3. Et gëtt NËMMEN fir Fuerschungszwecker benotzt!