CKMB Kreatinkinase Isoenzym (CKMB) Assay Kit (Enzymatesch Method)
In vitro Test fir d'quantitativ Bestëmmung vu Kreatinkinase-MB (CK-MB) Aktivitéit am Serum op photometresche Systemer. Kreatinkinase (CK) ass en Enzym, deen aus Isoenzyme haaptsächlech aus dem Muskel (CK-M) an dem Gehir (CK-B) besteet. CK existéiert am Serum an dimerescher Form als CK-MM, CK-MB, an CK-BB an als Makroenzym. Bestëmmung vu CK-MB Wäerter besëtzt héich Spezifizitéit bei myokardeschen Schued. Also, Miessung vu CK-MB gëtt fir Diagnostik an Iwwerwaachung vu myokardeschen Infarkt benotzt.
Stockage
Bis zum Verfallsdatum, deen um Label uginn ass, wann se onopgemaach bei 2-8 ℃ gespäichert a vu Liicht geschützt sinn. Eemol opgemaach, sinn d'Reagens stabil fir 28 Deeg wann se am Analyser oder am Frigo gekillt sinn. Kontaminatioun vun de Reagens muss vermeit ginn. Afréiere d'Reagens net. Eemol opgeléist ass de Kalibrator stabil fir 7 Deeg bei 2-8 ℃, d'Kontroll si stabil fir 7 Deeg bei 2-8 ℃, net afréieren.
Prinzip
An der Reaktioun katalyséiert d'Kreatin-Kinase-B den Transfer vun enger Phosphatgrupp vum Kreatinphosphat-Substrat op ADP. Déi spéider Bildung vun ATP gëtt gemooss duerch d'Benotzung vun zwee gekoppelte Reaktiounen katalyséiert duerch Hexokinase (HK) a Glukose-6-Phosphatdehydrogenase (G-6-PDH), wat zu der Produktioun vun der reduzéierter Form vun NADPH aus NADP resultéiert. Den Taux vun der Absorptiounserhéijung bei 405nm ass direkt proportional zu der Aktivitéit vu Kreatinkinase-B.
Reagens
| Komponenten | Konzentratioune |
| Reagens 1 (R1): |
|
| Imidazol Puffer | 100 mmol/L |
| Glukose | 20 mmol/L |
| N-Acetylcystein (NAC) | 20 mmol/L |
| Magnesiumacetat | 10 mmol/L |
| EDTA | 2 mmol/L |
| NADP | 2 mmol/L |
| AMP | 5 mmol/L |
| HK | >4 U/ml |
| Geess Anti-Mënsch polyclonal Antikörper | 2000 U/LCK-MM |
| Reagens 2(R2): |
|
| Kreatinphosphat | 30 mmol/L |
| ADP | 2 mmol/L |
| G-6-PDH | >4 U/ml |
Prouf Ufuerderunge
1. Serum, Heparin oder EDTA Plasma, an Urin si fir Proben gëeegent. Ganz Blutt, Hämolyse gëtt net als Probe benotzt. Frësch gezeechent Serum ass dat bevorzugt Exemplar.
2. Stabilitéit: Serum / Plasma: 1 Woch bei 2-8 ℃;
Kalibrator Virbereedung
Maacht d'Fläsch virsiichteg op, vermeit de Verloscht vu lyophilizat, a pipette genee 1,0 ml destilléiert / deioniséiertem Waasser. Maacht d'Flasche virsiichteg zou an léist den Inhalt komplett op duerch heiansdo sanft Wirbelen bannent 30 Minutten. Vermeiden d'Bildung vu Schaum. Den opgeléiste Kalibrator kann ouni aner Virbehandlung benotzt ginn.
Method
1. Reagenspräparatioun: Flësseg Reagens ka benotzt ginn wann se opgemaach ginn
2. Miessung:
ΔA/min = [ΔA/min Probe]- [ΔA/min blank]
Qualitéitskontroll Virbereedung
Eechung
| Main Wellelängt | 340 nm | Ënner Wellelängt | 4 05nm |
| Temperatur | 37 ℃ | Typ | Betrag A |
| Probe (Kalibrierung) | 10 μL | ||
| R1 | 200 μL | ||
| Mixen, inkubéieren fir 5min, dann addéieren: | |||
| R2 | 50 μl | ||
| Mix grëndlech, liest d'Absorptioun no 1 min a kontrolléiert d'Zäit. Liest d'Absorptioun nach eng Kéier fir weider 3 min. | |||
Et ass recommandéiert de Kalibrator vu Hyasens a destilléiert / deioniséiertem Waasser fir Zwee-Punkt Kalibratioun ze benotzen.
Kalibrierungsfrequenz: No der Reagenslot geännert.
Wéi néideg no Qualitéitskontrollprozeduren.
Qualitéitskontroll
Op d'mannst zwee Niveaue vu Kontrollmaterial solle mat all Batch vu Proben analyséiert ginn. All Labo
soll säin eegene internen Qualitéitskontrollschema a Prozedure fir Korrekturaktiounen etabléieren wann d'Kontrollen net bannent den akzeptablen Toleranzen erholen.
Referenzintervaller
All Labo soll seng eege Referenzintervaller op Basis vu senger Patientepopulatioun festleeën. D'Referenz Intervalle gemooss bei 37 ° C hei ënnendrënner opgezielt goufen aus Literatur geholl.
Serum / Plasma: ≤ 24 U/L
Interferenzen / Spezifizitéit
Déi folgend Substanzen goufen fir Interferenz mat dëser Methodik getest. Critère: Erhuelung bannent ± 10% vun initial Wäert.
| Substanz | Niveau getest | Observéiert Effekt |
| Ascorbinsäure | 30 mg/dl | NSI* |
| Bilirubin | 40 mg/dl | NSI |
| Triglycerid | 2000 mg/dl | NSI |
| * NSI: Keng bedeitend Interferenz (bannent ± 10%) | ||
Reagens eidel Absorptioun
D'Absorptioun vum Reagensblat bei 340 nm soll ≤0,6 A sinn.
SEnsitivitéit / Detectioun Limite
Déi niddregst moossbar CK Aktivitéit déi vun Null z'ënnerscheeden ass 10 U/L mat 99,7% Vertrauen.
Präzisioun
Am Laf: CV≤5%
Tëschenzäit: CV≤10%
Linearitéitsberäich
Konventionell Unitéiten: 10-600 U / L
Wann de Wäert vun der Probe méi wéi 600 U / L ass, soll d'Probe mat 9 g / L NaCl-Léisung (zB 1+ 9) verdünnt ginn an erëm lafen; d'Resultat soll mat 10 multiplizéiert ginn.
Warnungen a Virsiichtsmoossnamen
1. Fir in vitro diagnostesch Benotzung.
2. Huelt déi néideg Virsiichtsmoossnamen fir d'Benotzung vu Labo-Reagenz.
3. Konservéierungsmëttel enthalen. Net schlucken. Vermeiden Kontakt mat Haut a Schleimhaut.
4. Entsuergung vun all Offall Material soll am Aklang mat lokal Richtlinnen ginn.
5. Material Sécherheetsdatenblatt ass op Ufro fir professionell Benotzer verfügbar.
Referenzen
[1] Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rdEditioun. Burtis CA, Ashwood ER. WB Saunders Co., 1999.
[2] Gerhardt, W., Ljungdahl, L., Borjesson, J., Hovendahl, S., Hedenas, B., Clin. Chem. Acta, 78:29 (1979).
[3] National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wéi definéieren, bestëmmen a benotzen Referenzintervallen am Clinical Laboratory, Approved Guideline, CLSI Publikatioun C28-A, Villanova,PA (1995).
