Magnetinis universalus virusinės DNR/RNR rinkinys HYD521
Magnetinis universalus virusinės DNR/RNR rinkinys tinka virusinių nukleorūgščių išskyrimui iš viso kraujo arba beląstelinių kūno skysčių (pvz., serumo, plazmos, smegenų skysčio, nosies/ryklės tepinėlių, alveolių lavažo skysčio ir kt.). Šis metodas naudoja magnetinių granulių gryninimo technologiją, ir ekstrakcijos proceso metu nereikia toksiško fenolio chloroformo ekstrakcijos. Jis yra saugus, netoksiškas ir greitas. Gautą produktą galima tiesiogiai naudoti PGR, kPGR, antros kartos sekoskaitoje ir kituose eksperimentuose. Naudojant su magnetinių granulių automatinės ekstrakcijos prietaisais, galima pasiekti didelio našumo nukleorūgščių ekstrakciją.
Produkto informacija
| Komponentai | 48T |
| Lizės ir rišimo tirpalas | 33 ml |
| Magnetinių karoliukų pakaba | 1,1 ml |
| Skalbimo buferis A | 40 ml |
| Skalbimo buferis B | 80 ml |
| Eliucijos tirpalas | 10 ml |
| Proteinazė K | 1,1 ml |
Laikymo sąlygos
Proteinazę K reikia laikyti 2–8 ℃ temperatūroje, o kitas sudedamąsias dalis – kambario temperatūroje. Galiojimo laikas – 18 mėnesių.
Pavyzdžio aprašymas
1. Taikomi mėginių tipai: viso kraujo, serumo, plazmos, smegenų skysčio, nosies/ryklės tepinėlių, alveolių lavažo skysčio ir kiti mėginiai.
2. Mėginių laikymas ir transportavimas: Mėginius galima naudoti tyrimams nedelsiant arba laikyti -70 ℃ ar žemesnėje temperatūroje. Laikymo laikotarpis yra 6 mėnesiai. Reikėtų vengti pakartotinio užšaldymo ir atšildymo. Mėginiai transportuojami šaltos grandinės principu.
3. Užšaldymo-atšildymo reikalavimai: Greitas užšaldymas ir atšildymas, vengti pakartotinio užšaldymo ir atšildymo.
Operacija
Prieš eksperimentą patikrinkite, ar tirpale yra nuosėdų ir ar magnetinius karoliukus galima resuspenduoti.
1. Į 1,5 ml centrifugavimo mėgintuvėlį perkelkite 200–300 μL mėginio, paeiliui įpilkite 600 μL lizės ir jungimosi tirpalo, 20 μL proteinazės K ir 20 μL magnetinių karoliukų suspensijos ir dideliu greičiu maišykite sūkurinėje maišyklėje 30 sekundžių. Inkubuokite 50 ℃ temperatūroje 5–7 minutes. Jei termostatas neturi osciliacijos funkcijos, inkubacijos laikotarpiu 3 kartus sumaišykite sūkurinėje maišyklėje, kiekvieną kartą po 15 sekundžių.
2. Perkelkite į 1,5 ml magnetinį stovą magnetiniam atskyrimui, kol tirpalas taps skaidrus ir permatomas, ir išmeskite tirpalą.
3. Įpilkite 700 μL plovimo buferio A, 10 sekundžių pamaišykite sūkuriniame maišytuve, kad suskaidytumėte magnetines granules, tada perkelkite ant magnetinio stovo magnetiniam atskyrimui, kol tirpalas taps skaidrus, ir išpilkite tirpalą.
4. Įpilkite 700 μL plovimo buferio B, 10 sekundžių maišykite sūkuriniame maišytuve, kad suskaidytumėte magnetines granules, perkelkite ant magnetinio stovo magnetiniam atskyrimui, kol tirpalas taps skaidrus, ir išpilkite tirpalą.
5. Vėl įpilkite 700 μL plovimo buferio B, 10 sekundžių maišykite sūkuryje, kad suskaidytumėte magnetines granules, perkelkite ant magnetinio stovo magnetiniam atskyrimui, kol tirpalas taps skaidrus, ir išpilkite tirpalą.
6. Trumpai centrifuguokite, kad surinktumėte lašelius ant mėgintuvėlio sienelių, perkelkite ant magnetinio stovo skaidrinimui ir sugerkite likusį skystį. Džiovinkite ore 3–5 min.
Pastaba: etanolio likučiai slopins vėlesnes fermentų reakcijas, todėl džiovinant įsitikinkite, kad etanolis visiškai išgaruoja. Nedžiovinkite per ilgai, kad nepaveiktumėte vėlesnio eliucijos efekto.
7. Įpilkite 40–100 μL eliucijos tirpalo, dideliu greičiu sūkurinėje maišytuve 2–3 minutes suplakite, kad suskaidytumėte magnetines granules. Inkubuokite 60 ℃ temperatūroje 5 minutes, tada dideliu greičiu sūkurinėje maišytuve 60 s.
8. Momentiniu būdu centrifuguokite, kad surinktumėte skystį iš mėgintuvėlio dangtelio ir perkeltumėte jį į magnetinį stovą, kol magnetinės granulės bus visiškai adsorbuotos. Tada atsargiai perkelkite skystį į naują centrifugos mėgintuvėlį, kad gautumėte nukleorūgščių tirpalą.
9. Nukleino rūgšties tirpalą galima laikyti -20 °C temperatūroje trumpalaikiam saugojimui ir -80 °C temperatūroje ilgalaikiam saugojimui.
Pastabos
1. Įvairūs šiame rinkinyje esantys buferiai turi guanidino druskų. Dėl savo saugumo ir sveikatos dėvėkite laboratorinį chalatą ir vienkartines pirštines. Ir elkitės laikydamiesi saugos standartų atsargumo priemonių. Neleiskite buferiui patekti ant odos, akių ir gleivinių. Jei taip atsitiktų, nedelsdami nuplaukite dideliu kiekiu vandens ir kreipkitės į gydytoją.
2. Jei tirpalas nusėda, prieš naudojimą jį reikia mirkyti 30 ℃ temperatūros vandenyje, kol nuosėdos visiškai ištirps.
3. Jei magnetinių karoliukų suspensija užšalusi, jos nenaudokite.
4. Įvairūs šio rinkinio buferiai turi guanidino druskų. Jų apdorojimui nenaudokite oksiduojančių dezinfekavimo priemonių, tokių kaip natrio hipochloritas, nes išsiskirs toksiškos dujos ir su jais reikia elgtis kaip su medicininėmis atliekomis.
5. Eliucijos metu gali likti magnetinių karoliukų. Įsiurbdami mėginius, stenkitės neįkvėpti magnetinių karoliukų.