2× PCR премикс (будагч бодистой) HYA442
2× PCR мастер холимог нь Taq ДНХ полимераза, dNTP болон бусад PCR-д шаардлагатай бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг. Мастер холимог нь бидний тохируулсан тогтворжуулагчийн тусламжтайгаар 4℃-д 3 сарын турш тогтвортой байдаг. Урьдчилан холих уусмалыг уламжлалт PCR-д оновчтой болгож, ДНХ-ийн загвар болон праймеруудыг нэмснээр ашиглахад бэлэн болгодог. PCR бүтээгдэхүүнийг урьдчилан ачаалсан бромфенолын цэнхэр будагч бодисоор электрофорезд шууд ачаалж болно. Олшруулсан бүтээгдэхүүнүүд нь 3'-dA цухуйсан хэсгийг агуулдаг бөгөөд Т вектор болгон амархан клончилж болно. 2× PCR мастер холимог нь PCR процедурыг хялбарчилж, бохирдлыг бууруулдаг.
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Хэмжээ-1 | Хэмжээ-2 | Хэмжээ-3 |
| 2× PCR премикс (будагч бодистой) | 5 мл | 1 мл×15 | 1 мл×50 |
Хадгалах сан
-20°C температурт 2 жил хадгална.
Зааварчилгаа
1. Урвалын систем
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Эзлэхүүн |
| 2× PCR премикс (будагч бодистой) | 25 мкл |
| Урд талын праймер (10 мкМ) | 2 µл |
| Урвуу праймер (10 μM) | 2 µл |
| ДНХ-ийн загвар* | Хувьсах |
| ddH2ТЭР | 50 мкл хүртэл |
*Загварын хэрэглээ: 50-200 нг геномын ДНХ; 0.1-10 нг плазмидын ДНХ
2. Урвалын хөтөлбөр
| Алхам | Температур | Цаг хугацаа | Дугуйнууд |
| Анхны денатураци | 94 ℃ | 5 минут | 1 |
| Денатураци | 94 ℃ | 30 секунд | 35 |
| Халаах | 50-60 ℃ | 30 секунд | |
| Өргөтгөл | 72 ℃ | 30-60 сек/кб | |
| Эцсийн өргөтгөл | 72 ℃ | 10 минут | 1 |
| Барих | 4 ℃ | - | 1 |
1. Мг2+ концентраци: Энэ бүтээгдэхүүн нь 3 мМ MgCl2 агуулдаг2, ихэнх PCR урвалуудад тохиромжтой.
2. Хатаах температур: Праймерын онолын Tm утгыг харна уу. Хатаах температурыг праймерын онолын утгаас 2-5°C бага тохируулж болно.
3. Сунгах хугацаа: Молекулын таних зорилгоор 30 сек/кб-г зөвлөж байна. Генийн клонингийн хувьд 60 сек/кб-г зөвлөж байна.
Тэмдэглэл
1. 2× PCR Master Mix бүхий PCR бүтээгдэхүүнүүд нь полиакриламидын гель электрофорезд тохиромжгүй.
2. Аюулгүй байдал, эрүүл мэндийнхээ үүднээс ажлын үеэр лабораторийн халат, нэг удаагийн бээлий өмсөнө үү.
3. Үүнийг ЗӨВХӨН судалгааны зорилгоор ашигладаг!