Kit tad-DNA/RNA Virali Universali Manjetiku HYD521
Il-Kit Manjetiku Universali tad-DNA/RNA Virali huwa adattat għall-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku virali mid-demm sħiħ jew minn fluwidi tal-ġisem ħielsa miċ-ċelloli (bħal serum, plażma, fluwidu ċerebrospinali, tampuni nażali/farinġali, fluwidu tal-ħasil alveolari, eċċ.). Dan il-metodu juża teknoloġija ta' purifikazzjoni b'żibeġ manjetiċi, u l-ebda estrazzjoni ta' kloroform tal-fenol tossiku mhija meħtieġa matul il-proċess ta' estrazzjoni. Huwa sikur, mhux tossiku u veloċi. Il-prodott miksub jista' jintuża direttament fil-PCR, qPCR, sekwenzar tat-tieni ġenerazzjoni u esperimenti oħra. Meta jintuża ma' strumenti ta' estrazzjoni awtomatizzata b'żibeġ manjetiċi, tista' tinkiseb estrazzjoni b'rendiment għoli ta' aċidi nuklejċi.
Informazzjoni dwar il-prodott
| Komponenti | 48T |
| Soluzzjoni ta' Lisi u Binding | 33 mL |
| Sospensjoni ta' żibeġ manjetiċi | 1.1 mL |
| Buffer tal-ħasil A | 40 mL |
| Buffer tal-ħasil B | 80 mL |
| Soluzzjoni ta' eluzzjoni | 10 mL |
| Proteinażi K | 1.1 mL |
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Proteinase K għandha tinħażen f'temperatura ta' 2~8℃ u l-ingredjenti l-oħra għandhom jinħażnu f'temperatura tal-kamra. Il-ħajja fuq l-ixkaffa hija ta' 18-il xahar.
Deskrizzjoni tal-Kampjun
1. Tipi ta' kampjuni applikabbli: demm sħiħ, serum, plażma, fluwidu ċerebrospinali, kampjuni nażali/farinġali, fluwidu tal-lavaġġ alveolari u kampjuni oħra.
2. Ħażna u trasport tal-kampjuni: Il-kampjuni jistgħu jintużaw għall-ittestjar immedjatament jew jinħażnu f'temperatura ta' -70℃ jew inqas għall-ittestjar. Il-perjodu tal-ħażna huwa ta' 6 xhur. Għandu jiġi evitat l-iffriżar u t-tidwib ripetut. Il-kampjuni jiġu ttrasportati permezz ta' katina tal-kesħa.
3. Rekwiżiti ta' ffriżar u tidwib: Iffriżar u tidwib malajr, evita ffriżar u tidwib ripetuti.
Operazzjoni
Qabel l-esperiment, iċċekkja jekk is-soluzzjoni għandhiex preċipitazzjoni u jekk iż-żibeġ manjetiċi jistgħux jerġgħu jiġu sospiżi.
1. Ittrasferixxi 200~300 μL ta' kampjun għal tubu ċentrifugu ta' 1.5 mL, żid 600 μL ta' Lysis and Binding Solution, 20 μL ta' Proteinase K, u 20 μL ta' sospensjoni ta' żibeġ manjetiċi f'sekwenza, u ħawwad b'veloċità għolja għal 30 sekonda. Inkuba f'50℃ għal 5~7 minuti. Jekk it-termostat m'għandux funzjoni ta' oxxillazzjoni, ħawwad 3 darbiet matul il-perjodu ta' inkubazzjoni, kull darba għal 15-il sekonda.
2. Ittrasferixxi għal stand manjetiku ta' 1.5 mL għal separazzjoni manjetika sakemm is-soluzzjoni tkun ċara u trasparenti, u armi s-soluzzjoni.
3. Żid 700 μL ta' wash buffer A, ħawwad għal 10 sekondi biex tkisser il-perli manjetiċi, u mbagħad ittrasferixxi għal stand manjetiku għal separazzjoni manjetika sakemm is-soluzzjoni tkun ċara, u armi s-soluzzjoni.
4. Żid 700 μL ta' wash buffer B, ħawwad għal 10 sekondi biex tkisser il-perli manjetiċi, ittrasferixxi għal stand manjetiku għal separazzjoni manjetika sakemm is-soluzzjoni tkun ċara, u armi s-soluzzjoni.
5. Żid 700 μL ta' wash buffer B mill-ġdid, ħawwad bil-vortex għal 10 sekondi biex tkisser il-perli manjetiċi, ittrasferixxi għal stand manjetiku għal separazzjoni manjetika sakemm is-soluzzjoni tkun ċara, u armi s-soluzzjoni.
6. Iċċentrifuga fil-qosor biex tiġbor il-qtar fuq il-ħajt tat-tubu, ittrasferixxi għal stand manjetiku għaċ-ċarifikazzjoni, u assorbi l-likwidu residwu. Nixxef bl-arja għal 3-5 minuti.
Nota: Ir-residwu tal-etanol se jinibixxi reazzjonijiet sussegwenti tal-enzimi, għalhekk kun żgur li l-etanol jevapora kompletament meta jinxef. Tnixxefx għal żmien twil wisq biex tevita li taffettwa l-effett sussegwenti tal-elużjoni.
7. Żid 40~100 μL ta' Soluzzjoni ta' Eluzzjoni, ħawwad b'veloċità għolja għal 2~3 minuti biex tkisser iż-żibeġ manjetiċi. Inkuba f'60℃ għal 5 minuti, imbagħad ħawwad b'veloċità għolja għal 60 sekonda.
8. Ċentrifuga istantanja biex tiġbor il-likwidu mill-għatu tat-tubu u tittrasferih lejn l-ixkaffa manjetika sakemm iż-żibeġ manjetiċi jkunu assorbiti kompletament. Imbagħad ittrasferixxi bir-reqqa l-likwidu għal tubu taċ-ċentrifuga ġdid biex tikseb is-soluzzjoni tal-aċidu nuklejku.
9. Is-soluzzjoni tal-aċidu nuklejku tista' tinħażen f'-20°C għal ħażna għal żmien qasir u f'-80°C għal ħażna għal żmien twil.
Noti
1. Il-buffers varji f'dan il-kit fihom melħ tal-guanidina. Għas-sigurtà u s-saħħa tiegħek, jekk jogħġbok ilbes kowt tal-laboratorju u ingwanti li jintremew. U immaniġġja skont il-prekawzjonijiet standard tas-sigurtà. Tħallix il-buffer jiġi f'kuntatt mal-ġilda, l-għajnejn u l-membrani mukużi. Jekk jiġri dan, jekk jogħġbok aħsel immedjatament b'ħafna ilma u fittex attenzjoni medika.
2. Jekk is-soluzzjoni tippreċipita, jeħtieġ li tinħasel f'ilma ta' 30℃ sakemm il-preċipitat jinħall kompletament qabel l-użu.
3. Jekk is-sospensjoni tal-perli manjetiċi tkun iffriżata, tużahiex.
4. Il-buffers varji f'dan il-kit fihom melħ tal-guanidina. Tużax diżinfettanti ossidanti bħal sodium hypochlorite biex tittrattahom, inkella jiġu rilaxxati gassijiet tossiċi u għandhom jiġu ttrattati bħala skart mediku.
5. Jista' jkun hemm żibeġ manjetiċi residwali waqt l-eluzzjoni. Ipprova evita li tieħu n-nifs ta' żibeġ manjetiċi meta taspira kampjuni.