2× PCR-premiks (med fargestoff) HYA442
2× PCR Master Mix inneholder Taq DNA Polymerase, dNTP-er og andre PCR-nødvendige komponenter. Master Mix er stabil i 3 måneder ved 4 ℃ med våre tilpassede stabilisatorer. Forblandingsløsningen er optimalisert for konvensjonell PCR og klar til bruk ved å tilsette DNA-mal og primere. PCR-produktene kan lastes direkte for elektroforese med forhåndslastet bromfenolblått fargestoff. De amplifiserte produktene inneholder 3'-dA-protrusjon og kan enkelt klones inn i T-vektor. 2× PCR Master Mix forenkler PCR-prosedyren og reduserer kontaminering.
Komponenter
| Komponenter | Størrelse-1 | Størrelse-2 | Størrelse-3 |
| 2× PCR-premiks (med fargestoff) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Lagring
Oppbevares ved -20 °C i 2 år.
Instruksjoner
1. Reaksjonssystem
| Komponenter | Volum |
| 2× PCR-premiks (med fargestoff) | 25 µL |
| Fremoverprimer (10 μM) | 2 µL |
| Omvendt primer (10 μM) | 2 µL |
| DNA-mal* | Variabel |
| ddH2DE | Opptil 50 µL |
*Malbruk: 50-200 ng genomisk DNA; 0,1-10 ng plasmid DNA
2. Reaksjonsprogram
| Skritt | Temperatur | Tid | Sykluser |
| Innledende denaturering | 94 ℃ | 5 minutter | 1 |
| Denaturering | 94 ℃ | 30 sekunder | 35 |
| Gløding | 50–60 ℃ | 30 sekunder | |
| Forlengelse | 72 ℃ | 30–60 sek/kb | |
| Endelig forlengelse | 72 ℃ | 10 minutter | 1 |
| Holde | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ konsentrasjon: Dette produktet inneholder 3 mM MgCl2, egnet for de fleste PCR-reaksjoner.
2. Glødetemperatur: Se den teoretiske Tm-verdien for primere. Glødetemperaturen kan settes til 2–5 ℃ lavere enn den teoretiske verdien for primeren.
3. Forlengelsestid: For molekylær identifikasjon anbefales 30 sek/kb. For genkloning anbefales 60 sek/kb.
Notater
1. PCR-produkter med 2× PCR Master Mix er ikke egnet for polyakrylamidgelelektroforese.
2. For din sikkerhet og helse, vennligst bruk laboratoriefrakk og engangshansker under operasjonen.
3. Den brukes KUN til forskningsbruk!