2× PCR Premix (com corante) HYA442
O Master Mix 2× para PCR contém Taq DNA Polimerase, dNTPs e outros componentes necessários para a PCR. O Master Mix é estável por 3 meses a 4 °C com nossos estabilizadores personalizados. A solução pré-misturada é otimizada para PCR convencional e está pronta para uso, bastando adicionar o DNA molde e os primers. Os produtos de PCR podem ser carregados diretamente para eletroforese com o corante azul de bromofenol pré-carregado. Os produtos amplificados contêm uma protrusão 3'-dA e podem ser facilmente clonados em vetores T. O Master Mix 2× para PCR simplifica o procedimento de PCR e reduz a contaminação.
Componentes
| Componentes | Tamanho-1 | Tamanho-2 | Tamanho-3 |
| 2× Pré-mistura para PCR (com corante) | 5 mL | 1 mL×15 | 1 mL×50 |
Armazenar
Conservar a -20°C por 2 anos.
Instruções
1. Sistema de Reação
| Componentes | Volume |
| 2× Pré-mistura para PCR (com corante) | 25 µL |
| Primer direto (10 μM) | 2 µL |
| Primer reverso (10 μM) | 2 µL |
| Modelo de DNA* | Variável |
| ddH2O | Até 50 µL |
*Uso do modelo: 50-200 ng de DNA genômico; 0,1-10 ng de DNA plasmídico
2. Programa de Reação
| Etapa | Temperatura | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação inicial | 94 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturação | 94 ℃ | 30 segundos | 35 |
| Recozimento | 50-60 ℃ | 30 segundos | |
| Extensão | 72 ℃ | 30-60 segundos/kb | |
| Extensão final | 72 ℃ | 10 minutos | 1 |
| Segurar | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ Concentração: Este produto contém 3 mM de MgCl₂.2Adequado para a maioria das reações de PCR.
2. Temperatura de anelamento: Consulte o valor teórico de Tm dos primers. A temperatura de anelamento pode ser definida de 2 a 5 °C abaixo do valor teórico do primer.
3. Tempo de extensão: Para identificação molecular, recomenda-se 30 segundos/kb. Para clonagem de genes, recomenda-se 60 segundos/kb.
Notas
1. Os produtos de PCR com 2× PCR Master Mix não são adequados para eletroforese em gel de poliacrilamida.
2. Para sua segurança e saúde, utilize jaleco e luvas descartáveis durante a operação.
3. É destinado APENAS para fins de pesquisa!