Kit universal magnético para DNA/RNA viral HYD521
O Kit Universal Magnético para DNA/RNA Viral é adequado para extrair ácido nucleico viral de sangue total ou fluidos corporais acelulares (como soro, plasma, líquido cefalorraquidiano, swabs nasais/faríngeos, fluido de lavagem alveolar, etc.). Este método utiliza tecnologia de purificação por esferas magnéticas e não requer extração com fenol-clorofórmio tóxico durante o processo. É seguro, não tóxico e rápido. O produto obtido pode ser usado diretamente em PCR, qPCR, sequenciamento de segunda geração e outros experimentos. Quando usado com instrumentos automatizados de extração por esferas magnéticas, permite a extração de ácidos nucleicos em larga escala.
Informações sobre o produto
| Componentes | 48T |
| Solução de lise e ligação | 33 mL |
| Suspensão de contas magnéticas | 1,1 mL |
| Solução tampão de lavagem A | 40 mL |
| Solução tampão de lavagem B | 80 mL |
| Solução de eluição | 10 mL |
| Proteinase K | 1,1 mL |
Condições de armazenamento
A proteinase K deve ser armazenada entre 2 e 8 °C, e os demais ingredientes devem ser armazenados à temperatura ambiente. O prazo de validade é de 18 meses.
Descrição do exemplo
1. Tipos de amostras aplicáveis: sangue total, soro, plasma, líquido cefalorraquidiano, swabs nasais/faríngeos, fluido de lavagem alveolar e outras amostras.
2. Armazenamento e transporte de amostras: As amostras podem ser utilizadas para testes imediatamente ou armazenadas a -70 °C ou menos para posterior análise. O período de armazenamento é de 6 meses. Deve-se evitar o congelamento e descongelamento repetidos. As amostras devem ser transportadas em cadeia de frio.
3. Requisitos de congelamento e descongelamento: Congelamento e descongelamento rápidos, evitando ciclos repetidos.
Operação
Antes do experimento, verifique se a solução apresenta precipitação e se as microesferas magnéticas podem ser ressuspensas.
1. Transfira 200 a 300 μL da amostra para um tubo de centrífuga de 1,5 mL, adicione 600 μL da Solução de Lise e Ligação, 20 μL de Proteinase K e 20 μL da suspensão de esferas magnéticas em sequência e agite em vórtex em alta velocidade por 30 segundos. Incube a 50 °C por 5 a 7 minutos. Se o termostato não tiver função de oscilação, agite em vórtex 3 vezes durante o período de incubação, cada vez por 15 segundos.
2. Transfira para um suporte magnético de 1,5 mL para separação magnética até que a solução fique límpida e transparente, e descarte a solução.
3. Adicione 700 μL de tampão de lavagem A, agite em vórtex por 10 segundos para quebrar as esferas magnéticas e, em seguida, transfira para um suporte magnético para separação magnética até que a solução fique límpida e descarte a solução.
4. Adicione 700 μL de tampão de lavagem B, agite em vórtex por 10 s para quebrar as esferas magnéticas, transfira para um suporte magnético para separação magnética até que a solução fique límpida e descarte a solução.
5. Adicione novamente 700 μL de tampão de lavagem B, agite em vórtex por 10 s para quebrar as esferas magnéticas, transfira para um suporte magnético para separação magnética até que a solução esteja límpida e descarte a solução.
6. Centrifugue brevemente para coletar as gotículas na parede do tubo, transfira para um suporte magnético para clarificação e absorva o líquido residual. Deixe secar ao ar por 3 a 5 minutos.
Nota: Resíduos de etanol inibem reações enzimáticas subsequentes, portanto, certifique-se de que o etanol evapore completamente durante a secagem. Não deixe secar por muito tempo para evitar afetar o efeito da eluição subsequente.
7. Adicione 40 a 100 μL da solução de eluição e agite em vórtex em alta velocidade por 2 a 3 minutos para romper as microesferas magnéticas. Incube a 60 °C por 5 minutos e, em seguida, agite em vórtex em alta velocidade por 60 segundos.
8. Centrifugue instantaneamente para coletar o líquido da tampa do tubo e transfira-o para o suporte magnético até que as esferas magnéticas estejam completamente adsorvidas. Em seguida, transfira cuidadosamente o líquido para um novo tubo de centrífuga para obter a solução de ácido nucleico.
9. A solução de ácido nucleico pode ser armazenada a -20°C para armazenamento de curto prazo e a -80°C para armazenamento de longo prazo.
Notas
1. Os diversos tampões neste kit contêm sais de guanidina. Para sua segurança e saúde, utilize jaleco e luvas descartáveis. Manuseie o produto seguindo as normas de segurança. Evite o contato do tampão com a pele, olhos e mucosas. Em caso de contato, lave imediatamente com água em abundância e procure atendimento médico.
2. Caso a solução forme precipitado, deve-se imergi-la em água a 30°C até que o precipitado se dissolva completamente antes do uso.
3. Se a suspensão de microesferas magnéticas estiver congelada, não a utilize.
4. Os diversos tampões deste kit contêm sais de guanidina. Não utilize desinfetantes oxidantes, como hipoclorito de sódio, para tratá-los, caso contrário, gases tóxicos serão liberados e eles deverão ser descartados como resíduos médicos.
5. Podem restar partículas magnéticas residuais durante a eluição. Evite inalar partículas magnéticas ao aspirar as amostras.