Magnetická univerzálna súprava na stanovenie vírusovej DNA/RNA HYD521
Súprava Magnetic Universal Viral DNA/RNA je vhodná na extrakciu vírusovej nukleovej kyseliny z plnej krvi alebo telesných tekutín bez buniek (ako je sérum, plazma, mozgovomiechový mok, výtery z nosa/hltana, tekutina z alveolárnej laváže atď.). Táto metóda využíva technológiu čistenia magnetickými guľôčkami a počas procesu extrakcie nie je potrebná extrakcia toxickým fenol-chloroformom. Je bezpečná, netoxická a rýchla. Získaný produkt sa môže priamo použiť v PCR, qPCR, sekvenovaní druhej generácie a iných experimentoch. Pri použití s automatizovanými extrakčnými prístrojmi s magnetickými guľôčkami je možné dosiahnuť vysokokapacitnú extrakciu nukleových kyselín.
Informácie o produkte
| Komponenty | 48T |
| Roztok na lýzu a väzbu | 33 ml |
| Magnetická suspenzia guľôčok | 1,1 ml |
| Premývací pufor A | 40 ml |
| Premývací pufor B | 80 ml |
| Elučný roztok | 10 ml |
| Proteináza K | 1,1 ml |
Podmienky skladovania
Proteináza K by sa mala skladovať pri teplote 2 až 8 ℃ a ostatné zložky by sa mali skladovať pri izbovej teplote. Trvanlivosť je 18 mesiacov.
Ukážkový popis
1. Použiteľné typy vzoriek: plná krv, sérum, plazma, mozgovomiechový mok, výtery z nosa/hltana, tekutina z alveolárneho výplachu a iné vzorky.
2. Skladovanie a preprava vzoriek: Vzorky sa môžu použiť na testovanie ihneď alebo sa môžu skladovať pri teplote -70 ℃ alebo nižšej. Doba skladovania je 6 mesiacov. Treba sa vyhnúť opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu. Vzorky sa prepravujú chladiarenským reťazcom.
3. Požiadavky na zmrazovanie a rozmrazovanie: Rýchle zmrazovanie a rozmrazovanie, zabráňte opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu.
Prevádzka
Pred experimentom skontrolujte, či sa v roztoku vyzrážala a či je možné magnetické guľôčky resuspendovať.
1. Do 1,5 ml centrifugačnej skúmavky preneste 200 – 300 μl vzorky, postupne pridajte 600 μl lyzačného a väzbového roztoku, 20 μl proteinázy K a 20 μl suspenzie magnetických guľôčok a vírte pri vysokej rýchlosti 30 sekúnd. Inkubujte pri teplote 50 °C počas 5 – 7 minút. Ak termostat nemá funkciu oscilácie, vírte 3-krát počas inkubačnej doby, vždy po dobu 15 sekúnd.
2. Preneste do 1,5 ml magnetického stojana na magnetickú separáciu, kým roztok nie je číry a priehľadný, a potom roztok zlikvidujte.
3. Pridajte 700 μl premývacieho pufra A, vírte 10 sekúnd, aby sa rozbili magnetické guľôčky, a potom preneste do magnetického stojana na magnetickú separáciu, kým roztok nie je číry, a roztok zlikvidujte.
4. Pridajte 700 μl premývacieho pufra B, vírte 10 sekúnd, aby sa rozbili magnetické guľôčky, preneste do magnetického stojana na magnetickú separáciu, kým roztok nie je číry, a roztok zlikvidujte.
5. Znovu pridajte 700 μl premývacieho pufra B, vírte 10 sekúnd, aby sa rozbili magnetické guľôčky, preneste do magnetického stojana na magnetickú separáciu, kým roztok nie je číry, a roztok zlikvidujte.
6. Krátko centrifugujte, aby sa zachytili kvapôčky na stene skúmavky, preneste ich na magnetický stojan na vyčírenie a absorbujte zvyšnú kvapalinu. Nechajte vysušiť na vzduchu 3 – 5 minút.
Poznámka: Zvyšky etanolu inhibujú následné enzymatické reakcie, preto sa uistite, že sa etanol pri sušení úplne odparí. Nesušte príliš dlho, aby ste neovplyvnili následný elučný účinok.
7. Pridajte 40 – 100 μl elučného roztoku a miešajte na vortexu pri vysokej rýchlosti 2 – 3 minúty, aby sa rozbili magnetické guľôčky. Inkubujte pri teplote 60 °C počas 5 minút a potom miešajte na vortexu pri vysokej rýchlosti počas 60 sekúnd.
8. Okamžite centrifugujte, aby ste zozbierali tekutinu z uzáveru skúmavky a preniesli ju do magnetického stojana, kým sa magnetické guľôčky úplne neadsorbujú. Potom opatrne preneste tekutinu do novej centrifugačnej skúmavky, aby ste získali roztok nukleovej kyseliny.
9. Roztok nukleovej kyseliny sa môže skladovať pri teplote -20 °C na krátkodobé skladovanie a pri teplote -80 °C na dlhodobé skladovanie.
Poznámky
1. Rôzne pufre v tejto súprave obsahujú guanidínové soli. Pre vašu bezpečnosť a zdravie noste laboratórny plášť a jednorazové rukavice. A manipulujte v súlade s bezpečnostnými opatreniami. Zabráňte kontaktu pufra s pokožkou, očami a sliznicami. Ak sa tak stane, ihneď ich umyte veľkým množstvom vody a vyhľadajte lekársku pomoc.
2. Ak sa roztok zrazeniny vyzráža, je potrebné ho pred použitím ponoriť do vody s teplotou 30 ℃, kým sa zrazenina úplne nerozpustí.
3. Ak je suspenzia magnetických guľôčok zmrazená, nepoužívajte ju.
4. Rôzne pufre v tejto súprave obsahujú guanidínové soli. Na ich ošetrenie nepoužívajte oxidačné dezinfekčné prostriedky, ako je chlórnan sodný, inak sa uvoľnia toxické plyny a musia sa zlikvidovať ako zdravotnícky odpad.
5. Počas eluácie môžu zostať zvyškové magnetické guľôčky. Pri nasávaní vzoriek sa snažte vyhnúť vdýchnutiu magnetických guľôčok.