2× PCR predmešanica (z barvilom) HYA442
2× PCR Master Mix vsebuje Taq DNA polimerazo, dNTP-je in druge komponente, potrebne za PCR. Master Mix je stabilen 3 mesece pri 4 ℃ z našimi prilagojenimi stabilizatorji. Raztopina predmešanice je optimizirana za konvencionalno PCR in pripravljena za uporabo z dodatkom DNA matrice in primerjev. PCR produkte je mogoče neposredno naložiti za elektroforezo s predhodno naloženim bromofenol modrim barvilom. Amplificirani produkti vsebujejo 3'-dA izboklino in jih je mogoče enostavno klonirati v T vektor. 2× PCR Master Mix poenostavi postopek PCR in zmanjša kontaminacijo.
Komponente
| Komponente | Velikost-1 | Velikost-2 | Velikost-3 |
| 2× PCR predmešanica (z barvilom) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Shranjevanje
Shranjujte pri -20 °C 2 leti.
Navodila
1. Reakcijski sistem
| Komponente | Glasnost |
| 2× PCR predmešanica (z barvilom) | 25 μL |
| Prednji temeljni premaz (10 μM) | 2 µL |
| Reverzni temeljni premaz (10 μM) | 2 µL |
| Predloga DNK* | Spremenljivka |
| ddH2TA | Do 50 µL |
*Uporaba šablone: 50-200 ng genomske DNA; 0,1-10 ng plazmidne DNA
2. Reakcijski program
| Korak | Temperatura | Čas | Cikli |
| Začetna denaturacija | 94 ℃ | 5 minut | 1 |
| Denaturacija | 94 ℃ | 30 s | 35 |
| Žarjenje | 50–60 ℃ | 30 s | |
| Podaljšek | 72 ℃ | 30–60 s/kb | |
| Končni podaljšek | 72 ℃ | 10 minut | 1 |
| Drži | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ koncentracija: Ta izdelek vsebuje 3 mM MgCl2, primeren za večino PCR reakcij.
2. Temperatura žarjenja: Glejte teoretično vrednost Tm temeljnih premazov. Temperaturo žarjenja je mogoče nastaviti na 2–5 ℃ nižje od teoretične vrednosti temeljnega premaza.
3. Čas podaljšanja: Za molekularno identifikacijo je priporočenih 30 sekund/kb. Za kloniranje genov je priporočenih 60 sekund/kb.
Opombe
1. PCR produkti z 2× PCR Master Mix niso primerni za elektroforezo v poliakrilamidnem gelu.
2. Zaradi vaše varnosti in zdravja med delom nosite laboratorijske halje in rokavice za enkratno uporabo.
3. Uporablja se SAMO za raziskovalne namene!