2× PCR-premix (med färgämne) HYA442
2× PCR Master Mix innehåller Taq DNA-polymeras, dNTP:er och andra PCR-nödvändiga komponenter. Master Mix är stabil i 3 månader vid 4 ℃ med våra anpassade stabilisatorer. Förblandningslösningen är optimerad för konventionell PCR och klar att användas genom att tillsätta DNA-mall och primers. PCR-produkterna kan laddas direkt för elektrofores med förladdat bromfenolblått färgämne. De amplifierade produkterna innehåller 3'-dA-utbuktning och kan enkelt klonas in i T-vektorn. 2× PCR Master Mix förenklar PCR-proceduren och minskar kontaminering.
Komponenter
| Komponenter | Storlek-1 | Storlek-2 | Storlek-3 |
| 2× PCR-premix (med färgämne) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Lagring
Förvaras vid -20 °C i 2 år.
Instruktioner
1. Reaktionssystem
| Komponenter | Volym |
| 2× PCR-premix (med färgämne) | 25 µL |
| Framåtriktad primer (10 μM) | 2 µL |
| Omvänd primer (10 μM) | 2 µL |
| DNA-mall* | Variabel |
| ddH2DE | Upp till 50 µL |
*Mallanvändning: 50-200 ng genomiskt DNA; 0,1-10 ng plasmid-DNA
2. Reaktionsprogram
| Steg | Temperatur | Tid | Cykler |
| Initial denaturering | 94 ℃ | 5 minuter | 1 |
| Denaturering | 94 ℃ | 30 sekunder | 35 |
| Glödgning | 50-60 ℃ | 30 sekunder | |
| Förlängning | 72 ℃ | 30–60 sek/kb | |
| Slutlig förlängning | 72 ℃ | 10 minuter | 1 |
| Hålla | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ koncentration: Denna produkt innehåller 3 mM MgCl2, lämplig för de flesta PCR-reaktioner.
2. Glödgningstemperatur: Se primerns teoretiska Tm-värde. Glödgningstemperaturen kan ställas in på 2–5 ℃ lägre än primerns teoretiska värde.
3. Förlängningstid: För molekylär identifiering rekommenderas 30 sek/kb. För genkloning rekommenderas 60 sek/kb.
Anteckningar
1. PCR-produkter med 2× PCR Master Mix är inte lämpliga för polyakrylamidgelelektrofores.
2. För din säkerhet och hälsa, vänligen använd laboratorierockar och engångshandskar under arbetet.
3. Den används ENDAST för forskningsändamål!