2× PCR Premix （may Pangkulay） HYA442
Ang 2× PCR Master Mix ay naglalaman ng Taq DNA Polymerase, dNTPs, at iba pang mga sangkap na kinakailangan ng PCR. Ang Master Mix ay matatag sa loob ng 3 buwan sa 4℃ gamit ang aming mga customized na stabilizer. Ang pre-mix solution ay na-optimize para sa conventional PCR at handa nang gamitin sa pamamagitan ng pagdaragdag ng DNA template at mga primer. Ang mga produkto ng PCR ay maaaring direktang i-load para sa electrophoresis gamit ang pre-loaded na bromophenol blue dye. Ang mga amplified product ay naglalaman ng 3'-dA protrusion at madaling ma-clone sa T vector. Pinapasimple ng 2× PCR Master Mix ang pamamaraan ng PCR at binabawasan ang kontaminasyon.
Mga Bahagi
| Mga Bahagi | Sukat-1 | Sukat-2 | Sukat-3 |
| 2× PCR Premix (may Pangkulay) | 5mL | 1 mL × 15 | 1 mL × 50 |
Imbakan
Itabi sa -20°C sa loob ng 2 taon.
Mga Tagubilin
1. Sistema ng Reaksyon
| Mga Bahagi | Dami |
| 2× PCR Premix (may Pangkulay) | 25 uL |
| Pangunahing Panimulang Pantulong (10 μM) | 2 µL |
| Baliktad na Panimulang Panulat (10 μM) | 2 µL |
| Template ng DNA* | Pabagu-bago |
| ddH2ANG | Hanggang 50 µL |
*Template usage: 50-200 ng genomic DNA; 0.1-10 ng plasmid DNA
2. Programa ng Reaksyon
| Hakbang | Temperatura | Oras | Mga Siklo |
| Paunang Denaturasyon | 94 ℃ | 5 minuto | 1 |
| Denaturasyon | 94 ℃ | 30 segundo | 35 |
| Pag-anneal | 50-60 ℃ | 30 segundo | |
| Pagpapalawig | 72 ℃ | 30-60 segundo/kb | |
| Pangwakas na Pagpapalawig | 72 ℃ | 10 minuto | 1 |
| Hawakan | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ konsentrasyon: Ang produktong ito ay naglalaman ng 3 mM ng MgCl2, na angkop para sa karamihan ng mga reaksyon ng PCR.
2. Temperatura ng pag-init: Mangyaring sumangguni sa teoretikal na halaga ng Tm ng mga primer. Ang temperatura ng pag-init ay maaaring itakda sa 2-5℃ na mas mababa kaysa sa teoretikal na halaga ng primer.
3. Oras ng pagpapahaba: Para sa molekular na pagkakakilanlan, 30 segundo/kb ang inirerekomenda. Para sa gene cloning, 60 segundo/kb ang inirerekomenda.
Mga Tala
1. Ang mga produktong PCR na may 2× PCR Master Mix ay hindi angkop para sa polyacrylamide gel electrophoresis.
2. Para sa inyong kaligtasan at kalusugan, mangyaring magsuot ng lab coat at disposable gloves para sa operasyon.
3. Ito ay ginagamit LAMANG para sa pananaliksik!