Magnit universal virusli DNK/RNK to'plami HYD521
Magnit Universal Virusli DNK/RNK to'plami butun qon yoki hujayrasiz tana suyuqliklaridan (masalan, zardob, plazma, orqa miya suyuqligi, burun/tomoq tamponlari, alveolyar lavaj suyuqligi va boshqalar) virusli nuklein kislotasini ajratib olish uchun mos keladi. Bu usul magnit munchoqlarni tozalash texnologiyasidan foydalanadi va ekstraktsiya jarayonida toksik fenol xloroform ekstraktsiyasi talab qilinmaydi. Bu xavfsiz, toksik emas va tezdir. Olingan mahsulot to'g'ridan-to'g'ri PCR, qPCR, ikkinchi avlod ketma-ketligi va boshqa tajribalarda ishlatilishi mumkin. Magnit munchoqli avtomatlashtirilgan ekstraktsiya asboblari bilan ishlatilganda, nuklein kislotalarning yuqori samarali ekstraktsiyasiga erishish mumkin.
Mahsulot haqida ma'lumot
| Komponentlar | 48T |
| Lizis va bog'lovchi eritma | 33 ml |
| Magnit boncuk suspenziyasi | 1,1 ml |
| Yuvish buferi A | 40 ml |
| Yuvish buferi B | 80 ml |
| Elusiya eritmasi | 10 ml |
| Proteinaza K | 1,1 ml |
Saqlash shartlari
Proteinaza K 2 ~ 8℃ haroratda, boshqa ingredientlar esa xona haroratida saqlanishi kerak. Yaroqlilik muddati 18 oy.
Namuna tavsifi
1. Tegishli namunalar turlari: butun qon, zardob, plazma, orqa miya suyuqligi, burun/faringeal tamponlar, alveolyar lavaj suyuqligi va boshqa namunalar.
2. Namunalarni saqlash va tashish: Namunalar darhol sinov uchun ishlatilishi yoki sinov uchun -70℃ yoki undan past haroratda saqlanishi mumkin. Saqlash muddati 6 oy. Qayta muzlatish va eritishdan saqlanish kerak. Namunalar sovuq zanjir orqali tashiladi.
3. Muzlatish-eritish talablari: Tez muzlatish va eritish, takroriy muzlatish va eritishdan saqlaning.
Operatsiya
Tajribadan oldin, eritmada cho'kma borligini va magnit boncuklarni qayta osib qo'yish mumkinligini tekshiring.
1. 200-300 mkl namunani 1,5 ml santrifuga naychasiga o'tkazing, ketma-ket 600 mkl Lizis va bog'lash eritmasi, 20 mkl Proteinaza K va 20 mkl magnit munchoq suspenziyasini qo'shing va yuqori tezlikda 30 soniya davomida aylantiring. 50℃ da 5-7 daqiqa davomida inkubatsiya qiling. Agar termostatda tebranish funksiyasi bo'lmasa, inkubatsiya davrida 3 marta, har safar 15 soniya davomida aylantiring.
2. Eritma tiniq va shaffof bo'lguncha magnit ajratish uchun 1,5 ml magnit stendga o'tkazing va eritmani tashlang.
3. 700 mkl yuvish buferi A qo'shing, magnit boncuklarni parchalash uchun 10 soniya davomida aralashtiring va keyin eritma tiniq bo'lguncha magnit ajratish uchun magnit stendga o'tkazing va eritmani tashlang.
4. 700 mkl yuvish buferi B qo'shing, magnit boncuklarni parchalash uchun 10 soniya davomida vorteks qiling, eritma tiniq bo'lguncha magnit ajratish uchun magnit stendga o'tkazing va eritmani tashlang.
5. Yana 700 mkl yuvish buferi B qo'shing, magnit boncuklarni parchalash uchun 10 soniya davomida vorteks qiling, eritma tiniq bo'lguncha magnit ajratish uchun magnit stendga o'tkazing va eritmani tashlang.
6. Naycha devoridagi tomchilarni yig'ish uchun qisqa vaqtga santrifuga qiling, aniqlashtirish uchun magnit stendga o'tkazing va qoldiq suyuqlikni yuting. 3-5 daqiqa davomida havoda quriting.
Eslatma: Etanol qoldig'i keyingi ferment reaksiyalarini susaytiradi, shuning uchun quritganda etanolning to'liq bug'lanib ketishiga ishonch hosil qiling. Keyingi elutsiya ta'siriga ta'sir qilmaslik uchun juda uzoq vaqt quritmang.
7. 40~100 μL Elyutsiya eritmasini qo'shing, magnit boncuklarni parchalash uchun yuqori tezlikda 2~3 daqiqa davomida vorteks qiling. 60℃ da 5 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, so'ngra yuqori tezlikda 60 soniya davomida vorteks qiling.
8. Naycha qopqog'idan suyuqlikni yig'ish va magnit boncuklar to'liq adsorbsiyalanmaguncha uni magnit tokchaga o'tkazish uchun darhol santrifuga qiling. Keyin nuklein kislota eritmasini olish uchun suyuqlikni ehtiyotkorlik bilan yangi santrifuga naychasiga o'tkazing.
9. Nuklein kislota eritmasi qisqa muddatli saqlash uchun -20°C va uzoq muddatli saqlash uchun -80°C da saqlanishi mumkin.
Izohlar
1. Ushbu to'plamdagi turli xil buferlar tarkibida guanidin tuzlari mavjud. Xavfsizligingiz va sog'lig'ingiz uchun, iltimos, laboratoriya xalati va bir martalik qo'lqop kiying. Va xavfsizlik standartlariga muvofiq ishlang. Buferning teriga, ko'zlarga va shilliq pardalarga tegishiga yo'l qo'ymang. Agar shunday bo'lsa, darhol ko'p miqdorda suv bilan yuving va tibbiy yordamga murojaat qiling.
2. Agar eritma cho'kma hosil qilsa, ishlatishdan oldin cho'kma to'liq eriguncha uni 30℃ suvda cho'miltirish kerak.
3. Agar magnit munchoq suspenziyasi muzlab qolgan bo'lsa, undan foydalanmang.
4. Ushbu to'plamdagi turli xil buferlar guanidin tuzlarini o'z ichiga oladi. Ularni tozalash uchun natriy gipoxlorit kabi oksidlovchi dezinfektsiyalovchi vositalardan foydalanmang, aks holda zaharli gazlar ajralib chiqadi va ular tibbiy chiqindilar sifatida qayta ishlanishi kerak.
5. Elyutsiya paytida qoldiq magnit zarrachalar qolishi mumkin. Namunalarni so'rib olayotganda magnit zarrachalarni nafas olishdan saqlaning.